【摘 要】
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目的 观察人皮肤成纤维细胞被UVB照射后的光损伤、凋亡、周期阻滞和氧化应激损伤状态,并检测氧化应激的相关信号蛋白p66Shc的表达情况.方法 用小剂量UVB多次照射培养的人皮肤成纤维细胞,以细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)化学染色法观察细胞衰老状态,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶活性和丙二醛的含量,并以Western印迹法检测p66Shc蛋白的表达
【机 构】
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310003,杭州,浙江大学医学院附属第一医院皮肤科,310003,杭州,浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所,310003,杭州,浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所,310003,杭州,浙江大
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目的 观察人皮肤成纤维细胞被UVB照射后的光损伤、凋亡、周期阻滞和氧化应激损伤状态,并检测氧化应激的相关信号蛋白p66Shc的表达情况.方法 用小剂量UVB多次照射培养的人皮肤成纤维细胞,以细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)化学染色法观察细胞衰老状态,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶活性和丙二醛的含量,并以Western印迹法检测p66Shc蛋白的表达.结果 SA-β-Gal染色显示,培养的人皮肤成纤维细胞在UVB照射后呈强阳性染色;细胞凋亡率在未照射的对照组为0.96%,UVB照射组为37%;而细胞周期检测显示,经UVB照射的人皮肤成纤维细胞大部分阻滞于G0/G1期(80.07%).细胞内超氧化物歧化酶水平对照组为(52.35±4.97)ng/g蛋白,UVB照射组为(7.8l±0.68)ng/g蛋白(两组比较,P＜0.01);而丙二醛水平两组分别为(3.52±0.34)ng/g蛋白和(33.91±3.20)ng/g蛋白(两组比较,P＜0.05).人皮肤成纤维细胞经UVB照射诱导后24 h,p66Shc呈弱阳性表达,48 h后表达进一步增强.结论 培养的人皮肤成纤维细胞经UVB照射后进人氧化应激增强状态.p66Shc蛋白在此过程中表达逐渐增强。
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