【摘 要】
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从芝麻中提取总RNA,用反转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)得到芝麻蛋白Ses i 3基因,构建pET-22b(+)质粒表达载体,转入BL21 (DE3)感受态细胞宿主表达菌中诱导表达,经镍离子亲和层析柱获得纯品目的蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate
【基金项目】
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烹饪科学四川省高等学校重点实验室资助项目(PRKX2021Z01);
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从芝麻中提取总RNA,用反转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)得到芝麻蛋白Ses i 3基因,构建pET-22b(+)质粒表达载体,转入BL21 (DE3)感受态细胞宿主表达菌中诱导表达,经镍离子亲和层析柱获得纯品目的蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS-PAGE)结果显示目的蛋白分子质量约为66 kDa;进一步,采用BALB/c小鼠过敏模型评价重组Ses i 3蛋白与天然Ses i 3蛋白诱发小鼠芝麻过敏反应的差别,通过相关过敏性指标(特异性抗体IgE、IgG1和IgG2a;细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ和组胺)的测定发现,重组蛋白Ses i 3诱发小鼠芝麻过敏的能力与天然Ses i 3蛋白相似。因此,本研究通过原核表达系统获得了重组的芝麻重组蛋白Ses i 3,并证实了其与天然Ses i 3蛋白具有相似的免疫活性,可以用于后续的芝麻致敏性研究。
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