【摘 要】
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目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对于结缔组织生长因子(CTGF)生物学作用的影响及可能机制.方法 分别用RAPA 20 μg/L和40 μg/L预处理成肌纤维细胞(MyoF)30min后再加入CTGF 100 μg/L,与单独加入CTGF(CTGF组)和未加任何刺激的MyoF(对照组)进行比较.采用BrdU掺入法检测细胞的增殖反应;用Western印迹法检测绌胞上清中纤连蛋白(FN)的水平及细胞ER
【机 构】
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100034,北京大学第一医院肾脏内科北京大学肾脏病研究所,100034,北京大学第一医院肾脏内科北京大学肾脏病研究所,100034,北京大学第一医院肾脏内科北京大学肾脏病研究所
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目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对于结缔组织生长因子(CTGF)生物学作用的影响及可能机制.方法 分别用RAPA 20 μg/L和40 μg/L预处理成肌纤维细胞(MyoF)30min后再加入CTGF 100 μg/L,与单独加入CTGF(CTGF组)和未加任何刺激的MyoF(对照组)进行比较.采用BrdU掺入法检测细胞的增殖反应;用Western印迹法检测绌胞上清中纤连蛋白(FN)的水平及细胞ERK1/2信号的磷酸化.结果 与对照组相比,CTGF(100 μg/L)显著促进MyoF增殖(P<0.01),增加上清中FN的蛋白水平(P<0.05).与CTGF组相比,RAPA20 μg/L及40 μg/L预处理可使细胞增殖率显著下降,分别下降了62%和70%(均P<0.05),但两个剂量之间差异无统计学意义;使细胞上清中FN的蛋白水平分别下降了15%和44%,后者与CTGF组的差异有统计学意义(P<0.05).CTGF(100 μg/L)刺激10 min可敛MyoF的ERK1/2发生磷酸化,RAPA 40 μg/L预处理细胞30 min可显著降低CTGF诱导的ERK1/2磷酸化.以ERK1/2活化特异抑制剂PD98059(50 μmol/L)预处理30 min后,可以抑制CTGF诱导的细胞增殖效应(7%±5%比85%±7%,P<0.01)和FN的分泌效应(1.0±0.1比1.6±0.3,P<0.05).结论 RAPA具有部分抑制CTGF的促增殖和促细胞外基质分泌的作用,其作用可能通过抑制ERK1/2信号通路实现。
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