【摘 要】
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[目的]快速鉴定运动蛋白基因在烟草中的瞬时表达,进一步研究该外源基因的功能.[方法]将大麦黄矮病毒的运动蛋白基因定向克隆到马铃薯X病毒载体上,得到重组的马铃薯X病毒,电击
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[目的]快速鉴定运动蛋白基因在烟草中的瞬时表达,进一步研究该外源基因的功能.[方法]将大麦黄矮病毒的运动蛋白基因定向克隆到马铃薯X病毒载体上,得到重组的马铃薯X病毒,电击转化农杆菌后,利用农杆菌渗透注射技术注射到本牛烟草的叶片中,逐日跟踪观察病毒对烟草的侵染状况.[结果]重组的PVX病毒载体进行PCR鉴定和双酶切鉴定(Bam HI+Xho I),均得到了462 bp的基因片段,证明外源片段BYDV-MP确实克隆到了PVX病毒载体GR107上.将含有重组的PVX病毒载体GR107-MP和空的PVX病毒载体GR107的农杆菌渗透缓冲液注射到5～6叶期的烟草幼苗后,第7天观察,重组病毒载体侵染的烟草系统叶有病毒侵染症状,而对照组未有此现象.对2组实验进行逐日跟踪观察,重组病毒载体侵染的烟草有较严重的病毒侵染症状和叶片卷曲现象,后期引起注射叶及系统叶坏死.而空病毒载体侵染的烟草只有轻微的病毒侵染症状,并能够恢复健康.对侵染的烟草进行RT-PER检测,结果表明外源基因BYDV-MP在烟草体内进行了正常的转录和表达.[结论]BYDV-MP蛋白促进了PVX的系统侵染速度,加重了系统侵染的病毒症状,是病毒病症的决定因子;利用PVX表达载体表达异源MP的方法是可行的.
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