【摘 要】
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目的 提高酯酶B1融合蛋白的表达量,研究pThioHisA-B1/DH5a工程菌株的最优发酵条件.方法 依次在不同的培养基(LB,SOB,YT,TB)、诱导时间(1-8 h)、诱导剂浓度(0.3-1 mmol/L)、诱
【机 构】
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泰山医学院化学与化学工程学院,山东泰安,271016;泰山医学院药学院,山东泰安,271016;中国农业科学院研究生院,北京,100081
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目的 提高酯酶B1融合蛋白的表达量,研究pThioHisA-B1/DH5a工程菌株的最优发酵条件.方法 依次在不同的培养基(LB,SOB,YT,TB)、诱导时间(1-8 h)、诱导剂浓度(0.3-1 mmol/L)、诱导温度(25～37℃)等因素变化下,研究融合蛋白的表达量;目的 产物经SDS-PAGE电泳和薄层凝胶扫描,以获得最佳表达条件.结果 工程菌优化的发酵条件为,最适宜的培养基为TB,诱导剂IPTG的最佳浓度为0.4 mmol/L,最佳诱导时间为6 h,最佳诱导温度为28℃.工程菌在最佳条件下表达时,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40.3%,其中66.2%为可溶性蛋白.结论 本实验筛选出了工程菌的最优化发酵条件,利用本实验的优化条件可获得高产量、可溶性的酯酶B1融合蛋白,为酯酶B1的进一步放大生产和实际应用奠定了基础.
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