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摘 要 目的:建立同时测定硫酸沃拉帕沙原料药中7种有机溶剂残留量的方法。方法:采用顶空气相色谱法。色谱柱为Agilent DB-624毛细管柱,程序升温,进样口温度为220 ℃,检测器为氢火焰离子化检测器,检测器温度为250 ℃,载气为氮气(纯度:99.999%),流速为2.0 mL/min,分流比为20 ∶ 1,顶空进样量为1 mL,顶空平衡温度为80 ℃,顶空平衡时间为30 min。结果:乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃、甲苯检测质量浓度线性范围分别为2.0~201.0 μg/mL(r=0.999 8)、1.2~122.3 μg/mL(r=0.999 4)、0.24~24.0 μg/mL(r=0.999 2)、2.0~200.3 μg/mL(r=0.999 9)、0.2~16.7 μg/mL(r=0.999 9)、0.3~29.0 μg/mL(r=0.999 3)、0.4~35.8 μg/mL(r=0.999 3);定量限分別为2.0、1.2、0.24、2.0、0.2、0.3、0.4 μg/mL,检出限分别为0.60、0.30、0.07、0.60、0.06、0.09、0.12 μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于4%;加样回收率分别为97.02%~99.84%(RSD=0.88%,n=9)、98.05%~99.64%(RSD=0.54%,n=9)、97.37%~100.00%(RSD=0.83%,n=9)、98.67%~99.60%(RSD=0.34%,n=9)、 97.56%~99.76%(RSD=0.79%,n=9)、97.22%~99.45%(RSD=0.65%,n=9)、97.75%~99.33%(RSD=0.59%,n=9);耐用性试验的RSD均小于8%。原料药样品中仅检出甲醇、乙醇。结论:该方法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性、耐用性好,可用于硫酸沃拉帕沙原料药中7种有机溶剂残留量的同时测定。
关键词 顶空气相色谱法;硫酸沃拉帕沙;残留溶剂
中图分类号 R927.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2018)16-2224-04
ABSTRACT OBJECTIVE: To establish simultaneous determination of 7 kinds of residual solvents in vorapaxar sulfate raw material. METHODS: The headspace gas chromatography was performed on Agilent DB-624 capillary column(programmed temperature) with inlet temperature of 220 ℃, detection temperature of 250 ℃ using nitrogen(99.999%) as carrier gas at the flow rate of 2.0 mL/min. The split ratio was 20 ∶ 1, and sample size was 1 mL. The headspace equilibrium temperature was 80 ℃,headspace equilibrium time was 30 min. RESULTS: The linear range of ethyl acetate, methanol, dichloromethane, ethanol, acetonitrile, tetrahydrofuran and toluene were 2.0-201.0 μg/mL(r=0.999 8), 1.2-122.3 μg/mL(r=0.999 4), 0.24-24.0 μg/mL(r=0.999 2), 2.0-200.3 μg/mL(r=0.999 9), 0.2-16.7 μg/mL(r=0.999 9), 0.3-29.0 μg/mL(r=0.999 3), 0.4-35.8 μg/mL(r=0.999 3), respectively. The limits of quantification were 2.0, 1.2, 0.24, 2.0, 0.2, 0.3, 0.4 μg/mL; the limits of detection were 0.60, 0.30, 0.07, 0.60, 0.06, 0.09, 0.12 μg/mL. RSDs of precision, stability and reproducibility tests were all lower than 4%. The recoveries were 97.02%-99.84%(RSD=0.88%,n=9), 98.05%-99.64%(RSD=0.54%,n=9), 97.37%-100.00%(RSD=0.83%,n=9), 98.67%-99.60%(RSD=0.34%,n=9), 97.56%-99.76%(RSD=0.79%,n=9), 97.22%-99.45%(RSD=0.65%,n=9), 97.75%-99.33%(RSD=0.59%,n=9), respectively. RSDs of durability tests were all lower than 8%. Methanol, ethanol were detected in samples. CONCLUSIONS: The method is simple, accurate, precise, stable, reproducible and durable, and can be used for simultaneous determination of 7 kinds of residual solvents in vorapaxar sulfate raw material. KEYWORDS Headspace gas chromatography; Vorapaxar sulfate; Residual solvents
硫酸沃拉帕沙(Vorapaxar sulfate)是一种可逆性蛋白酶激活受体1(PAR-1)拮抗药,能够选择性地阻断凝血酶介导的血小板激活通路,同时,不影响二磷酸腺苷、胶原、血栓烷介导的血小板聚集,达到既抑制血栓形成又保留生理性止血能力的目的,较其他传统抗血小板药物有较大优势[1-4]。临床上,硫酸沃拉帕沙主要用于有心肌梗死和外周动脉栓塞病史的患者,以降低其血栓性心血管事件的发生率[5-6]。2014年5月8日,硫酸沃拉帕沙获美国FDA批准上市,商品名Zontivity[2,7]。目前2015年版《中国药典》、《歐洲药典》(9.0版)、《日本药典》(16版)与《美国药典》(40版)均未收载该药。已有文献报道了硫酸沃拉帕沙片的溶出度测定方法[8],但尚未见有关于硫酸沃拉帕沙原料药中有机溶剂残留量测定的报道。硫酸沃拉帕沙后5步合成工艺中分别使用了乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯等有机溶剂。为确保药品的安全、有效和质量可控,根据2015年版《中国药典》(四部)[9]的相关规定和人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)指导原则[10-11]的相关要求,应增加有机溶剂的考察。因此,笔者对硫酸沃拉帕沙原料药中7种有机溶剂的残留量进行了同时测定,以完善其药品质量检测项目。
1 材料
1.1 仪器
7890N型气相色谱仪,包含氢火焰离子化检测器(FID)、7697A顶空自动进样器等(美国Agilent公司);BS 210S型十万分之一电子分析天平(德国Sartorius公司);ZUPT-I-20T型纯水机(台湾艾柯电子有限公司)。
1.2 药品与试剂
硫酸沃拉帕沙原料药[山东省化学药物重点实验室自制,批号:20171001(纯度:99.8%)、20171002(纯度:99.7%)、20171003(纯度:99.8%)]; 乙酸乙酯对照品(批号:20161106,纯度:99.7%)、甲醇对照品(批号:20170206,纯度:99.8%)、二氯甲烷对照品(批号:20170310,纯度:99.5%)、乙醇对照品(批号:20161208,纯度:99.8%)、乙腈对照品(批号:20170808,纯度:99.8%)、四氢呋喃对照品(批号:20160912,纯度:99.8%)、甲苯对照品(批号:20170502,纯度:99.6%)均购自国药集团化学试剂有限公司;N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Agilent DB-624毛细管柱(30 m×0.53 mm,3.0 μm);升温程序:初始温度为40 ℃,保持8 min,以25 ℃/min的速度升温至160 ℃,保持2 min;进样口温度:220 ℃;检测器:FID;检测器温度:250 ℃;载气:氮气(纯度:99.999%);流速:2.0 mL/min;分流比:20 ∶ 1;顶空进样量:1 mL;顶空瓶装样量:5 mL;顶空平衡温度:80 ℃;顶空平衡时间:30 min。
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液 分别称取各待测成分对照品适量,置于同一100 mL量瓶中,加DMF溶解并定容,摇匀,制成乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃、甲苯质量浓度分别为500、300、60、500、41、72、89 μg/mL的混合对照品贮备液。精密量取上述混合对照品贮备液5 mL,置于50 mL量瓶中,加DMF定容,摇匀,即得。
2.2.2 供试品溶液 精密称取原料药样品0.5 g,置于顶空瓶中,精密加入DMF 5 mL,密封,振摇使溶解,即得。
2.2.3 空白对照溶液 精密量取DMF 5 mL作为空白对照溶液。
2.3 系统适用性试验
精密量取“2.2”项下空白对照溶液、混合对照品溶液和供试品溶液各适量,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录色谱图,详见图1。结果,理论板数以甲醇峰计为39 548;各待测成分峰分离度均大于2。
2.4 线性关系考察
分别精密量取“2.2.1”项下混合对照品贮备液0.1、0.5、1、2、3、4、5、10 mL,置于25 mL量瓶中,加DMF定容,摇匀,制成系列混合对照品溶液。精密量取上述系列混合对照品溶液各5 mL,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。以各待测成分质量浓度(x,μg/mL)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标进行线性回归,回归方程与线性范围见表1。
2.5 定量限与检出限考察
分别精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,倍比稀释,并按“2.1”项下色谱条件进样测定,以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算定量限、检出限。结果,乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯的定量限分别为2.0、1.2、0.24、2.0、0.2、0.3、0.4 μg/mL,检出限分别为0.60、0.30、0.07、0.60、0.06、0.09、0.12 μg/mL。
2.6 精密度试验
取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次,记录峰面积。结果,乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯峰面积的RSD分别为2.4%、3.6%、3.7%、2.8%、3.3%、2.9%、2.8%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验
取“2.2.2”项下供试品溶液(批号:20171001)适量,置于10 mL量瓶中,加入“2.2.1”项下混合对照品贮备液1.0 mL,加DMF定容,摇匀,分别于室温下放置0、2、4、6、8 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。结果,乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯峰面积的RSD分别为3.2%、3.8%、2.9%、3.4%、2.7%、2.8%、3.1%(n=5),表明供试品溶液在室温下放置8 h内基本稳定。 2.8 重复性试验
精密称取原料药样品(批号:20171001)适量,共6份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计算样品残留量。结果,乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲苯均未检出;甲醇和乙醇残留量平均值分别为0.01%、0.06%,RSD分别为2.8%、1.9%(n=6),表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率试验
取已知残留量原料药样品(批号:20171001)适量,共9份,分别加入低、中、高质量浓度的各待测成分对照品溶液适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计算加样回收率,结果见表2。
2.10 耐用性试验
2.10.1 色谱柱考察 精密称取原料药样品(批号:20171002)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件[分别设置色谱柱为DB-624(30 m×0.53 mm,3.0 μm)、AT-624(30 m×0.53 mm,3.0 μm)、 CP-624(30 m×0.53 mm,3.0 μm)]进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,色谱柱发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.10.2 顶空平衡温度考察 精密称取原料药样品(批号:20171002)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件(分别设置顶空温度为79、80、81 ℃)进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,顶空平衡温度发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.10.3 流速考察 精密称取原料药样品(批号:20171003)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件(分别设置流速为1.9、2.0、2.1 mL/min)进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,流速发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.10.4 柱温(初始温度)考察 精密称取原料药样品(批号:20171003)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件[分别设置柱温(初始温度)为39、40、41 ℃]进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,柱温(初始温度)发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.11 样品残留量测定
取3批样品各适量,分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,平行测定3次,记录峰面积并以外标法计算7种有机溶剂的残留量,结果见表4。
3 讨论
3.1 进样方式的选择
本试验待测成分均为低沸点溶剂,虽然直接进样相比顶空进样操作简单,但是待测样品在高温条件下可能分解出挥发性产物干扰测定结果,故本试验采用顶空进样方式[11-12]。
3.2 色谱柱的选择
笔者前期分别选择了不同极性的毛细管柱进行试验,如DB-1701、HP-1、HP-5、DB-624。结果,采用HP-1柱进样测定时,甲醇、二氯甲烷与乙醇峰不能完全分离;采用DB-1701、HP-5柱进样测定时,乙酸乙酯与甲醇峰不能完全分离;而采用DB-624柱进样测定时,各待测成分峰之间的分离度均符合要求[13]。因此,选择DB-624为本试验的色谱柱。
3.3 溶剂的选择
顶空气相色谱法常用溶剂为水、DMF、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜。硫酸沃拉帕沙的水溶性较差,因此不可以水为溶剂。经考察硫酸沃拉帕沙在DMF中溶解性良好,且DMF在各待测成分之后出峰,对测定结果无干扰,故本试验选用DMF作为溶剂。
综上所述,本方法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性、耐用性好,可用于硫酸沃拉帕沙原料药中7种有机溶剂残留量的同时测定。
参考文献
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[13] 张佳莉、顾冬飞. 毛细管气相色谱法同时测定盐酸普萘洛尔原料药中5种有机溶剂残留量[J]. 中国药房,2015,26(6):831-833.
(收稿日期:2017-10-11 修回日期:2018-02-15)
(编辑:张 静)
关键词 顶空气相色谱法;硫酸沃拉帕沙;残留溶剂
中图分类号 R927.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2018)16-2224-04
ABSTRACT OBJECTIVE: To establish simultaneous determination of 7 kinds of residual solvents in vorapaxar sulfate raw material. METHODS: The headspace gas chromatography was performed on Agilent DB-624 capillary column(programmed temperature) with inlet temperature of 220 ℃, detection temperature of 250 ℃ using nitrogen(99.999%) as carrier gas at the flow rate of 2.0 mL/min. The split ratio was 20 ∶ 1, and sample size was 1 mL. The headspace equilibrium temperature was 80 ℃,headspace equilibrium time was 30 min. RESULTS: The linear range of ethyl acetate, methanol, dichloromethane, ethanol, acetonitrile, tetrahydrofuran and toluene were 2.0-201.0 μg/mL(r=0.999 8), 1.2-122.3 μg/mL(r=0.999 4), 0.24-24.0 μg/mL(r=0.999 2), 2.0-200.3 μg/mL(r=0.999 9), 0.2-16.7 μg/mL(r=0.999 9), 0.3-29.0 μg/mL(r=0.999 3), 0.4-35.8 μg/mL(r=0.999 3), respectively. The limits of quantification were 2.0, 1.2, 0.24, 2.0, 0.2, 0.3, 0.4 μg/mL; the limits of detection were 0.60, 0.30, 0.07, 0.60, 0.06, 0.09, 0.12 μg/mL. RSDs of precision, stability and reproducibility tests were all lower than 4%. The recoveries were 97.02%-99.84%(RSD=0.88%,n=9), 98.05%-99.64%(RSD=0.54%,n=9), 97.37%-100.00%(RSD=0.83%,n=9), 98.67%-99.60%(RSD=0.34%,n=9), 97.56%-99.76%(RSD=0.79%,n=9), 97.22%-99.45%(RSD=0.65%,n=9), 97.75%-99.33%(RSD=0.59%,n=9), respectively. RSDs of durability tests were all lower than 8%. Methanol, ethanol were detected in samples. CONCLUSIONS: The method is simple, accurate, precise, stable, reproducible and durable, and can be used for simultaneous determination of 7 kinds of residual solvents in vorapaxar sulfate raw material. KEYWORDS Headspace gas chromatography; Vorapaxar sulfate; Residual solvents
硫酸沃拉帕沙(Vorapaxar sulfate)是一种可逆性蛋白酶激活受体1(PAR-1)拮抗药,能够选择性地阻断凝血酶介导的血小板激活通路,同时,不影响二磷酸腺苷、胶原、血栓烷介导的血小板聚集,达到既抑制血栓形成又保留生理性止血能力的目的,较其他传统抗血小板药物有较大优势[1-4]。临床上,硫酸沃拉帕沙主要用于有心肌梗死和外周动脉栓塞病史的患者,以降低其血栓性心血管事件的发生率[5-6]。2014年5月8日,硫酸沃拉帕沙获美国FDA批准上市,商品名Zontivity[2,7]。目前2015年版《中国药典》、《歐洲药典》(9.0版)、《日本药典》(16版)与《美国药典》(40版)均未收载该药。已有文献报道了硫酸沃拉帕沙片的溶出度测定方法[8],但尚未见有关于硫酸沃拉帕沙原料药中有机溶剂残留量测定的报道。硫酸沃拉帕沙后5步合成工艺中分别使用了乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯等有机溶剂。为确保药品的安全、有效和质量可控,根据2015年版《中国药典》(四部)[9]的相关规定和人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)指导原则[10-11]的相关要求,应增加有机溶剂的考察。因此,笔者对硫酸沃拉帕沙原料药中7种有机溶剂的残留量进行了同时测定,以完善其药品质量检测项目。
1 材料
1.1 仪器
7890N型气相色谱仪,包含氢火焰离子化检测器(FID)、7697A顶空自动进样器等(美国Agilent公司);BS 210S型十万分之一电子分析天平(德国Sartorius公司);ZUPT-I-20T型纯水机(台湾艾柯电子有限公司)。
1.2 药品与试剂
硫酸沃拉帕沙原料药[山东省化学药物重点实验室自制,批号:20171001(纯度:99.8%)、20171002(纯度:99.7%)、20171003(纯度:99.8%)]; 乙酸乙酯对照品(批号:20161106,纯度:99.7%)、甲醇对照品(批号:20170206,纯度:99.8%)、二氯甲烷对照品(批号:20170310,纯度:99.5%)、乙醇对照品(批号:20161208,纯度:99.8%)、乙腈对照品(批号:20170808,纯度:99.8%)、四氢呋喃对照品(批号:20160912,纯度:99.8%)、甲苯对照品(批号:20170502,纯度:99.6%)均购自国药集团化学试剂有限公司;N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Agilent DB-624毛细管柱(30 m×0.53 mm,3.0 μm);升温程序:初始温度为40 ℃,保持8 min,以25 ℃/min的速度升温至160 ℃,保持2 min;进样口温度:220 ℃;检测器:FID;检测器温度:250 ℃;载气:氮气(纯度:99.999%);流速:2.0 mL/min;分流比:20 ∶ 1;顶空进样量:1 mL;顶空瓶装样量:5 mL;顶空平衡温度:80 ℃;顶空平衡时间:30 min。
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液 分别称取各待测成分对照品适量,置于同一100 mL量瓶中,加DMF溶解并定容,摇匀,制成乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃、甲苯质量浓度分别为500、300、60、500、41、72、89 μg/mL的混合对照品贮备液。精密量取上述混合对照品贮备液5 mL,置于50 mL量瓶中,加DMF定容,摇匀,即得。
2.2.2 供试品溶液 精密称取原料药样品0.5 g,置于顶空瓶中,精密加入DMF 5 mL,密封,振摇使溶解,即得。
2.2.3 空白对照溶液 精密量取DMF 5 mL作为空白对照溶液。
2.3 系统适用性试验
精密量取“2.2”项下空白对照溶液、混合对照品溶液和供试品溶液各适量,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录色谱图,详见图1。结果,理论板数以甲醇峰计为39 548;各待测成分峰分离度均大于2。
2.4 线性关系考察
分别精密量取“2.2.1”项下混合对照品贮备液0.1、0.5、1、2、3、4、5、10 mL,置于25 mL量瓶中,加DMF定容,摇匀,制成系列混合对照品溶液。精密量取上述系列混合对照品溶液各5 mL,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。以各待测成分质量浓度(x,μg/mL)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标进行线性回归,回归方程与线性范围见表1。
2.5 定量限与检出限考察
分别精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,倍比稀释,并按“2.1”项下色谱条件进样测定,以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算定量限、检出限。结果,乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯的定量限分别为2.0、1.2、0.24、2.0、0.2、0.3、0.4 μg/mL,检出限分别为0.60、0.30、0.07、0.60、0.06、0.09、0.12 μg/mL。
2.6 精密度试验
取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次,记录峰面积。结果,乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯峰面积的RSD分别为2.4%、3.6%、3.7%、2.8%、3.3%、2.9%、2.8%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验
取“2.2.2”项下供试品溶液(批号:20171001)适量,置于10 mL量瓶中,加入“2.2.1”项下混合对照品贮备液1.0 mL,加DMF定容,摇匀,分别于室温下放置0、2、4、6、8 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。结果,乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙腈、四氢呋喃和甲苯峰面积的RSD分别为3.2%、3.8%、2.9%、3.4%、2.7%、2.8%、3.1%(n=5),表明供试品溶液在室温下放置8 h内基本稳定。 2.8 重复性试验
精密称取原料药样品(批号:20171001)适量,共6份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计算样品残留量。结果,乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲苯均未检出;甲醇和乙醇残留量平均值分别为0.01%、0.06%,RSD分别为2.8%、1.9%(n=6),表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率试验
取已知残留量原料药样品(批号:20171001)适量,共9份,分别加入低、中、高质量浓度的各待测成分对照品溶液适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计算加样回收率,结果见表2。
2.10 耐用性试验
2.10.1 色谱柱考察 精密称取原料药样品(批号:20171002)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件[分别设置色谱柱为DB-624(30 m×0.53 mm,3.0 μm)、AT-624(30 m×0.53 mm,3.0 μm)、 CP-624(30 m×0.53 mm,3.0 μm)]进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,色谱柱发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.10.2 顶空平衡温度考察 精密称取原料药样品(批号:20171002)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件(分别设置顶空温度为79、80、81 ℃)进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,顶空平衡温度发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.10.3 流速考察 精密称取原料药样品(批号:20171003)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件(分别设置流速为1.9、2.0、2.1 mL/min)进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,流速发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.10.4 柱温(初始温度)考察 精密称取原料药样品(批号:20171003)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件[分别设置柱温(初始温度)为39、40、41 ℃]进样测定,记录峰面积并计算样品残留量,结果见表3。结果表明,柱温(初始温度)发生一定程度变化时,本方法能满足试验要求,提示耐用性良好。
2.11 样品残留量测定
取3批样品各适量,分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,平行测定3次,记录峰面积并以外标法计算7种有机溶剂的残留量,结果见表4。
3 讨论
3.1 进样方式的选择
本试验待测成分均为低沸点溶剂,虽然直接进样相比顶空进样操作简单,但是待测样品在高温条件下可能分解出挥发性产物干扰测定结果,故本试验采用顶空进样方式[11-12]。
3.2 色谱柱的选择
笔者前期分别选择了不同极性的毛细管柱进行试验,如DB-1701、HP-1、HP-5、DB-624。结果,采用HP-1柱进样测定时,甲醇、二氯甲烷与乙醇峰不能完全分离;采用DB-1701、HP-5柱进样测定时,乙酸乙酯与甲醇峰不能完全分离;而采用DB-624柱进样测定时,各待测成分峰之间的分离度均符合要求[13]。因此,选择DB-624为本试验的色谱柱。
3.3 溶剂的选择
顶空气相色谱法常用溶剂为水、DMF、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜。硫酸沃拉帕沙的水溶性较差,因此不可以水为溶剂。经考察硫酸沃拉帕沙在DMF中溶解性良好,且DMF在各待测成分之后出峰,对测定结果无干扰,故本试验选用DMF作为溶剂。
综上所述,本方法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性、耐用性好,可用于硫酸沃拉帕沙原料药中7种有机溶剂残留量的同时测定。
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(收稿日期:2017-10-11 修回日期:2018-02-15)
(编辑:张 静)