研究HSP90抑制剂FW–04–806对Bcr/Abl阳性白血病细胞(K562和HL60/Bcr–Abl)的体外抗肿瘤活性及其机制。
方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测FW–04–806对HL60、K562和HL60/Bcr–Abl细胞的增殖抑制作用，碘化丙啶(PI)染色法检测FW–04–806对K562细胞细胞周期的影响，annexin V–FITC/PI双染法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞凋亡的影响，Western blot法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞增殖和凋亡通路相关蛋白表达的影响，线粒体膜电位法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞线粒体膜电位的影响，免疫共沉淀法检测FW–04–806对K562和HK60/Bcr–Abl细胞中HSP90/CDC37/Bcr–Abl复合物形成的影响，实时定量PCR法检测FW–04–806对K562和HL60/Bcr–Abl细胞中Bcr/Abl mRNA表达水平的影响。
结果FW–04–806对HL60、K562和HL60/Bcr–Abl细胞的增殖均有明显的抑制作用，其IC50分别为(30.89±0.12)μmol/L、(9.76±0.19)μmol/L和(8.03±0.26)μmol/L，差异有统计学意义(P<0.001)。20和40 μmol/L FW–04–806作用于K562细胞24 h后，K562细胞的凋亡率分别为(17.40±0.34)%和(34.33±5.00)%，与对照组[(8.30±0.53)%]比较，差异有统计学意义(P＝0.003)；20和40 μmol/L FW–04–806作用于HL60/Bcr–Abl细胞24 h后，HL60/Bcr–Abl细胞的凋亡率分别为(18.90±1.45)%和(35.60±3.55)%，与对照组[(8.11±2.62)%]比较，差异有统计学意义(P＝0.001)。不同浓度FW–04–806处理K562和HL60/Bcr–Abl细胞24 h后，K562和HL60/Bcr–Abl细胞中p–Bcr–Abl及下游p–Stat和p–Crkl呈浓度依赖性降低，AKT、ERK、C–Raf蛋白及其磷酸化水平亦呈浓度依赖性降低。FW–04–806可使K562和HL60/Bcr–Abl细胞的膜电位水平呈浓度依赖性下降，并可干扰K562和HL60/Bcr–Abl细胞中CDC37与HSP90的结合，抑制HSP90/CDC37/Bcr–Abl复合物的形成，但对Bcr–Abl mRNA的表达无明显影响。
结论FW–04–806能明显抑制Bcr/Abl阳性白血病细胞的增殖，并促进其发生凋亡，具有明显的体外抗肿瘤活性。