【摘 要】
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从开花后５０－９０ｄ的萝卜种子中提取总ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ第一链，通过ＰＣＲ反应，得到Ｒｓ－ＡＦＰ１和Ｒｓ－ＡＦＰ２基因扩增产物。采用Ｔ－载体克隆技术，将二者分别插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ／ＥｃｏＲＶ－Ｔ克隆载体，得到重组质粒ｐＧＲ－１和ｐＧＲ－２用其转化宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α，从阳性菌落制备测序用
【机 构】
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中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,571101
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从开花后５０－９０ｄ的萝卜种子中提取总ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ第一链，通过ＰＣＲ反应，得到Ｒｓ－ＡＦＰ１和Ｒｓ－ＡＦＰ２基因扩增产物。采用Ｔ－载体克隆技术，将二者分别插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ／ＥｃｏＲＶ－Ｔ克隆载体，得到重组质粒ｐＧＲ－１和ｐＧＲ－２用其转化宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α，从阳性菌落制备测序用质粒ＤＮＡ样品，在ＡＢ１３７０Ａ ＤＮＡ测序仪上测序。
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