【摘 要】
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目的:研究线粒体核转录因子Tfam对CD11c+树突状细胞的基因表达的影响,为进一步探讨Tfam参与调控细胞免疫反应提供新的分子机制。方法:利用条件性基因敲除技术,进行打靶载体的设计和构建,基于Cre/loxP重组酶系统建立表达CD11c特异性敲除Tfam基因的小鼠模型。利用磁珠分选试剂盒分选小鼠脾脏的CD11c细胞,并通过流式细胞仪验证分选纯度(90%以上)。用Trizol法抽提CD11c+树突
【机 构】
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广州医科大学附属口腔医院广东省口腔组织修复与重建工程技术研究中心广州市口腔再生医学基础与应用研究重点实验室
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目的:研究线粒体核转录因子Tfam对CD11c+树突状细胞的基因表达的影响,为进一步探讨Tfam参与调控细胞免疫反应提供新的分子机制。方法:利用条件性基因敲除技术,进行打靶载体的设计和构建,基于Cre/loxP重组酶系统建立表达CD11c特异性敲除Tfam基因的小鼠模型。利用磁珠分选试剂盒分选小鼠脾脏的CD11c细胞,并通过流式细胞仪验证分选纯度(90%以上)。用Trizol法抽提CD11c+树突状细胞的RNA,利用mRNA转录组测序检测CD11c+树突状细胞的基因表达谱。通过生物信息学方法比较2组细胞间的显著差异表达基因(DEGs)。通过GO、KEGG富集分析差异表达蛋白质编码基因功能。结果:以Tfamfl/fl小鼠脾脏组织分选的CD11c+树突状细胞为对照组,2组小鼠共筛选出140个差异表达的基因,其中上调的基因有84个,下调的基因有56个。采用组间log2FC≥0.585且P值≤0.05的基因筛选为DEGs,2组细胞共筛选出48个DEGs,其中28个DEGs表达上调,20个DEGs表达下调。GO分析富集到的DEGs与细胞杀伤的积极调节与免疫系统过程的调节等有关。DEGs的KEGG富集分析到的通路主要与恰加斯病、松弛素信号通路等通路有关。结论:Tfam基因敲除的CD11c+树突状细胞DEGs主要富集在免疫系统过程的调节、免疫相关的反应、线粒体代谢、线粒体基因的表达等,为探讨Tfam调节CD11c+树突状细胞免疫功能提供了相关的分子机制基础。
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