丙型肝炎病毒核心蛋白6号结合蛋白基因启动子序列的确定及转录活性鉴定

来源 :中华肝脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xingke198621
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目的 研究丙型肝炎病毒(H CV)核心蛋白6号结合蛋白基因(H cbp6)序列表达的调控机制.方法根据软件对启动子的预测,选取翻译起始密码子ATG上游3 256 bp及下游180 bp的DNA序列,分成5段活性区域,分别以聚合酶链反应技术(P C R),肝母细胞瘤细胞系H ep G 2基因组D N A为模板,扩增该启动子DNA片段,将其克隆至pCAT3中,构建pCAT 3 Hcbp6 p报告基因表达载体,将该质粒分别转染H ep G 2、NI H 3 T 3细胞,用酶联免疫吸附法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶(C A T)的表达活性.结果发现质粒pCAT3 Hcbp6-1066p和pCAT3-Hcbp6 240p能够指导CAT的表达,其平均吸光度值(A)是pCAT3 basic对照质粒的3.1倍和6.4倍.结论本研究克隆的启动子DNA序列具有转录活性,这一结果为研究H c bp6的调节机制,进一步阐明H CV核心蛋白的作用机制奠定了基础。

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