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目的 了解无荚膜型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株中外膜脂蛋白D(LPD)基因分布及其序列保守性,确定重组表达的LPD(rLPD)免疫原性和免疫保护性。方法采用PCR检测NTH临床菌株中LPD基因,T-A克隆后测序。构建LPD基因原核表达系统,采用Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rLPD。采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rLPD表达情况及其产量。采用ELISA和Westernblot检测rLPD的抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rLPD对NTHi致死性感染的免疫保护效果。结果所有NTHi菌株均检出LPD基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达98.0%~99.4%和98.5%~100%。所构建的原核表达系统能高效表达rLPD。rLPD免疫家兔可产生高效价抗体,NTHi全菌兔抗血清及NTHi感染患儿血清能识别rLPD并与之结合。ELISA结果显示,93.6%(58/62)和53.2%(32/62)NTHi感染患儿血清分别rLPD-IgM和rLPD-IgG阳性。100μg或200μgrLPD对NTHi致死性感染小鼠的免疫保护率分别为60.0%或73.3%。结论LPD基因在NTHi菌株中广泛分布且序列保守,其重组表达产物rLPD具有良好的免疫原性及一定的免疫保护作用,可作为NTHi基因工程疫苗候选抗原之一。