【摘 要】
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目的:探讨正清风痛宁缓释片对人类类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响及作用机制.方法:正清风痛宁缓释片干预FLS后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HOXA转录本反义RNA1(HOTAIRM1)和微小RNA-137(miR-137)表达水平,ELISA法检测细胞中IL-1α和IL-6表达水平.转染HOTAIRM1小干扰RNA至
【机 构】
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安徽医科大学药学院,合肥230032;皖南医学院第二附属医院药剂科,芜湖241000;安徽医科大学药学院,合肥230032
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目的:探讨正清风痛宁缓释片对人类类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响及作用机制.方法:正清风痛宁缓释片干预FLS后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HOXA转录本反义RNA1(HOTAIRM1)和微小RNA-137(miR-137)表达水平,ELISA法检测细胞中IL-1α和IL-6表达水平.转染HOTAIRM1小干扰RNA至FLS,上述相同方法检测抑制HOTAIRM1表达对FLS存活率、凋亡率及Caspase-3蛋白、IL-1α和IL-6表达的影响.转染HOTAIRM1过表达载体或miR-137抑制剂至FLS,上述相同方法检测过表达HOTAIRM1或抑制miR-137表达后正清风痛宁缓释片干预的FLS存活率、凋亡率及Caspase-3蛋白、IL-1α和IL-6表达变化.结果:不同剂量正清风痛宁缓释片干预FLS后,细胞存活率及HO-TAIRM1、IL-1α和IL-6表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率、Caspase-3蛋白、miR-137表达水平显著升高(P<0.05).抑制HO-TAIRM1表达后,细胞存活率、IL-1α和IL-6表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05).HOTAIRM1在FLS中靶向负调控miR-137表达.过表达HOTAIRM1或抑制miR-137表达后,正清风痛宁缓释片干预的FLS存活率、IL-1α和IL-6表达水平显著升高(P<0.05),凋亡率和Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论:正清风痛宁缓释片可能通过抑制HOTAIRM1表达进而上调miR-137表达诱导FLS凋亡及降低炎症反应从而发挥治疗RA的作用.
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