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【摘要】目的：为改进传统的操作理念让冰冻切片更接近石蜡切片的组织结构，以保证术中冰冻切片的高诊断率。方法：本文强调新鲜活体组织取材后迅速冻结，通过恒温式冰冻切片机切片，HE染色。结果：镜下组织结构清楚，形态清晰，细胞核、浆色彩鲜艳对比分明，无脱片和冰晶现象产生，近似石蜡切片。结论：要获得一张高质量的冰冻切片，必须加强责任心，在日常工作中不断学习，掌握关键性技术操作要领，为提高病理诊断率提供更有利的条件。
【关键词】冰冻切片;制片;染色
【中图分类号】R736.1 【文献标识码】A
冰冻切片是借助低温恒冷条件使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法，具有快速方便的特点，而大范围用于临床手术中的快速病理診断[1]。术中确诊病变性质，是决定手术范围的依据。因此，制作优质的冰冻切片至关重要。这就要求每个病理技术员不仅要有高度的责任心，还要有熟练的技术，用最短的时间，制作最优的切片。我科在工作中不断改进，摸索出一种制片效果比较满意的冰冻切片制作方法，从而保证了冰冻切片更接近石蜡切片的组织结构。
1材料与方法
1.1一般材料
1.1.1冰冻切片机和包埋剂
采用德国LEICA CM 1950冷冻恒温切片机。包埋剂使用聚乙二醇和聚乙烯醇（OCT）。
1.1.2试剂
95%乙醇、苏木素染液、伊红染液、1%盐酸乙醇、梯度乙醇、二甲苯、树胶。
1.1.3组织标本
组织来源于2019年全年完成冰冻切1112例。
1.1.4其他材料
一次性刀片、细头毛笔、硬毛刷、镊子、组织托，玻片及盖玻片。[2]
1.2方法
取新鲜活体组织，组织的取材大小<15mm×15mm×3mm为宜，取材使用的工具避免沾湿水。将取材好的组织用擦手纸包绕并稍用力挤压，使其尽量吸附组织表面的血迹或其他液体及组织间液[2]。然后置标本于制冷台上，冻头上先加少量胶，等稍凝固再放上组织，同时再加胶。冰冻后切片，冷风稍吹干，迅速入固定液（95%乙醇）加温（40℃）固定10s，水洗15s，苏木素染核2分钟，水洗15s，1%盐酸乙醇分化1s，水洗返蓝2分钟，入酒精性伊红1s，95%乙醇和无水乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
2结果
使用该方法制作的冰冻切片质量好，无皱褶，结构完好，未见冰晶。染色鲜艳，镜下组织结构和细胞形态清晰，细胞核、浆对比分明，细胞均无肿胀、无萎缩，封片无溢胶和气泡，近似石蜡切片图（1，2）。
3讨论
冰冻切片在组织学技术中应用范围较广，在冰冻切片过程中规定20～25min内完成制片[3]，对临床手术的快速诊断其意义更大。同时，病理术中冰冻切片诊断准确率直接反映出病理科面对风险的能力以及间接反映出医院的手术水平。若要提高和保持较高的准确率，病理技术员很关键。因此，保证和提高制片质量是每个技术员的责任。我们以此为目标，从以下5个操作环节加以改进：
3.1温度 冰冻温度是影响冰冻切片的关键。我科冰冻切片机在待机时冻台和冻头温度均设在-18℃，在冰冻切片时，根据不同的组织来设定温度：腮腺组织设置温度在-18℃～-16℃;脑组织、淋巴结组织设置温度在-22℃～-18℃[4];甲状腺温度不宜过低在-18℃～-15℃[5];乳腺组织设置温度在-22℃～-18℃;子宫设置温度在-20℃-18℃;脂肪组织适宜在-35℃[6]。
3.2冰冻时间 组织冰冻时间不够就切片，不容易成片或者细胞结构模糊，如果冰冻时间过长切片容易产生龟裂或细胞严重收缩。机器温度的设定，组织的性质、大小厚度，直接影响冰冻时间。因此建议当OCT胶最表面或组织表面冻到发白或凝固后马上进行修片。
3.3包埋 冰冻头上先加入少量OCT胶，然后再放组织，同时在组织周围添加OCT胶，将组织完全置入胶内，这样可以防止切片时组织边缘卷起或产生皱褶。
3.4固定 冰冻切片切好后，用吹风机冷风稍吹干，立即放入加温（40℃）95%乙醇固定液中，避免在空气中放置时间过长。长时间放置在空气中，镜下观察冰冻切片时细胞有云雾感，组织结构不清晰。
3.5染色 染色时尽量保证染液的新鲜，我们将酒精性伊红染液50%稀释，使细胞浆颜色不会太深。细胞核、浆色彩鲜艳对比分明，镜下组织结构清楚，细胞形态清晰。
如何做好术中冰冻切片，这一领域还有许多值得探讨的空间。总之在日常的工作中不断学习，积累和提高，掌握关键性技术操作要领，加强责任心，让冰冻切片更接近石蜡切片的组织结构，为提高病理诊断提供更有利的条件。
参考文献：
[1]邓江，黎相照。固定液温度对冰冻切片质量的影响。中国实用医药，2020（15）22，202-204.
[2]黄燚彬。冰冻切片制片的细节要点总结。实用医技杂志，2020（27）06，792-793.
[3]杨霞。常用冰冻固定液对冰冻制片效果的差异分析。养身保健指南，2018（7）：238
[4]黄跃，张睿，吴德江等。冰冻切片的制作。现代医药卫生，2017，33（21）：3358-3359.
[5]贺德智。浅谈如何制作优良的甲状腺冰冻切片。基层医学论坛，2016，20（22）：3167-3168
[6]胡垚。富含脂肪及淋巴组织的冰冻切片制片体会。哈尔滨医药，2015，35（3）：200-202
【关键词】冰冻切片;制片;染色
【中图分类号】R736.1 【文献标识码】A
冰冻切片是借助低温恒冷条件使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法，具有快速方便的特点，而大范围用于临床手术中的快速病理診断[1]。术中确诊病变性质，是决定手术范围的依据。因此，制作优质的冰冻切片至关重要。这就要求每个病理技术员不仅要有高度的责任心，还要有熟练的技术，用最短的时间，制作最优的切片。我科在工作中不断改进，摸索出一种制片效果比较满意的冰冻切片制作方法，从而保证了冰冻切片更接近石蜡切片的组织结构。
1材料与方法
1.1一般材料
1.1.1冰冻切片机和包埋剂
采用德国LEICA CM 1950冷冻恒温切片机。包埋剂使用聚乙二醇和聚乙烯醇（OCT）。
1.1.2试剂
95%乙醇、苏木素染液、伊红染液、1%盐酸乙醇、梯度乙醇、二甲苯、树胶。
1.1.3组织标本
组织来源于2019年全年完成冰冻切1112例。
1.1.4其他材料
一次性刀片、细头毛笔、硬毛刷、镊子、组织托，玻片及盖玻片。[2]
1.2方法
取新鲜活体组织，组织的取材大小<15mm×15mm×3mm为宜，取材使用的工具避免沾湿水。将取材好的组织用擦手纸包绕并稍用力挤压，使其尽量吸附组织表面的血迹或其他液体及组织间液[2]。然后置标本于制冷台上，冻头上先加少量胶，等稍凝固再放上组织，同时再加胶。冰冻后切片，冷风稍吹干，迅速入固定液（95%乙醇）加温（40℃）固定10s，水洗15s，苏木素染核2分钟，水洗15s，1%盐酸乙醇分化1s，水洗返蓝2分钟，入酒精性伊红1s，95%乙醇和无水乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
2结果
使用该方法制作的冰冻切片质量好，无皱褶，结构完好，未见冰晶。染色鲜艳，镜下组织结构和细胞形态清晰，细胞核、浆对比分明，细胞均无肿胀、无萎缩，封片无溢胶和气泡，近似石蜡切片图（1，2）。
3讨论
冰冻切片在组织学技术中应用范围较广，在冰冻切片过程中规定20～25min内完成制片[3]，对临床手术的快速诊断其意义更大。同时，病理术中冰冻切片诊断准确率直接反映出病理科面对风险的能力以及间接反映出医院的手术水平。若要提高和保持较高的准确率，病理技术员很关键。因此，保证和提高制片质量是每个技术员的责任。我们以此为目标，从以下5个操作环节加以改进：
3.1温度 冰冻温度是影响冰冻切片的关键。我科冰冻切片机在待机时冻台和冻头温度均设在-18℃，在冰冻切片时，根据不同的组织来设定温度：腮腺组织设置温度在-18℃～-16℃;脑组织、淋巴结组织设置温度在-22℃～-18℃[4];甲状腺温度不宜过低在-18℃～-15℃[5];乳腺组织设置温度在-22℃～-18℃;子宫设置温度在-20℃-18℃;脂肪组织适宜在-35℃[6]。
3.2冰冻时间 组织冰冻时间不够就切片，不容易成片或者细胞结构模糊，如果冰冻时间过长切片容易产生龟裂或细胞严重收缩。机器温度的设定，组织的性质、大小厚度，直接影响冰冻时间。因此建议当OCT胶最表面或组织表面冻到发白或凝固后马上进行修片。
3.3包埋 冰冻头上先加入少量OCT胶，然后再放组织，同时在组织周围添加OCT胶，将组织完全置入胶内，这样可以防止切片时组织边缘卷起或产生皱褶。
3.4固定 冰冻切片切好后，用吹风机冷风稍吹干，立即放入加温（40℃）95%乙醇固定液中，避免在空气中放置时间过长。长时间放置在空气中，镜下观察冰冻切片时细胞有云雾感，组织结构不清晰。
3.5染色 染色时尽量保证染液的新鲜，我们将酒精性伊红染液50%稀释，使细胞浆颜色不会太深。细胞核、浆色彩鲜艳对比分明，镜下组织结构清楚，细胞形态清晰。
如何做好术中冰冻切片，这一领域还有许多值得探讨的空间。总之在日常的工作中不断学习，积累和提高，掌握关键性技术操作要领，加强责任心，让冰冻切片更接近石蜡切片的组织结构，为提高病理诊断提供更有利的条件。
参考文献：
[1]邓江，黎相照。固定液温度对冰冻切片质量的影响。中国实用医药，2020（15）22，202-204.
[2]黄燚彬。冰冻切片制片的细节要点总结。实用医技杂志，2020（27）06，792-793.
[3]杨霞。常用冰冻固定液对冰冻制片效果的差异分析。养身保健指南，2018（7）：238
[4]黄跃，张睿，吴德江等。冰冻切片的制作。现代医药卫生，2017，33（21）：3358-3359.
[5]贺德智。浅谈如何制作优良的甲状腺冰冻切片。基层医学论坛，2016，20（22）：3167-3168
[6]胡垚。富含脂肪及淋巴组织的冰冻切片制片体会。哈尔滨医药，2015，35（3）：200-202