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【摘 要】目的：观察氨氯地平对食饵性兔动脉粥样硬化氧化损伤的影响，探求氨氯地平抗动脉粥样硬化（AS）机制。方法：在高胆固醇饮食基础上建立兔AS模型，随机分组，检测各组兔主动脉AS面积、全血超氧化物歧化酶（SOD）活力、血清丙二醛含量及血清脂质浓度。结果：氨氯地平组兔主动脉AS面积显著降低（P<0.01），SOD活力明显升高（P<0.01），丙二醛含量减少（P<0.01）。结论：氨氯地平通过改善抗氧化系统而延缓动脉粥样硬化的进程。
【关键词】氨氯地平；动脉粥样硬化；氧化损伤；辛伐他汀
【文章编号】1004-7484（2014）02-0717-02
氨氯地平是广泛用于临床的第三代新型长效l，4-二氢吡啶类钙通道阻滞剂（calcium channel blockers，CCB）。近年来，许多研究资料提出氨氯地平在不降低血脂及血压的条件下，可能通过抗氧化、减少炎性因子及细胞因子的生成，延缓AS进程，但确切机制仍不清楚。本文通过动物试验观察食饵性兔SOD-MDA系统的变化及氨氯地平对SOD-MDA系统的影响。
1 材料和方法
1.1 实验分组及造模 健康雄性纯种新西兰白兔24只，体重2.25±0.33kg，3个月龄。实验前适应性饲养10天。随机分为4组：⑴正常对照组（n=6）：基础颗粒饲料120～150g/天；⑵AS模型组（n=6）：造膜饲料（基础颗粒饲料+2%猪油+1%胆固醇）；⑶氨氯地平组（n=6）：造模饲料+氨氯地平；⑷辛伐他汀组（n=6）：造模饲料+辛伐他汀。各组动物分别在实验前经耳中央动脉和24周实验结束时经心腔采血检验。
1.2血清总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定 采血后立即分离血清，采用酶比色法检测。
1.3血清丙二醛（MDA）测定 采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒通过硫代巴比妥酸法检测。
1.4 全血超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力测定 羟胺法检测。每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个活力单位。
1.5 兔主动脉AS面积测定 于实验24周末，在10%水合氯醛麻醉下，取各组动物主动脉标本（由主动脉弓至腹主动脉分叉处），剥去外膜脂肪及结缔组织，纵向剖开，生理盐水冲洗后置于10%中性福尔马林中固定。标本经苏丹IV染色后应用图象分析仪测定主动脉内膜脂质斑块面积百分比。
1.6 统计学处理：采用SPSS11.5统计软件分析数据。全部数据以均数±标准差（ ）表示，用one-way ANOVA进行统计学处理，组间比较用Student-Newman-Keuls法检验，P <0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 血脂水平测定结果 氨氯地平组较对照组血清TC、LDL-C、TG明显升高（P <0.01）；氨氯地平组TC、LDL-C、TG与模型组无明显差异（P >0.05）；氨氯地平组TC、LDL-C、TG水平高于辛伐他汀组（P <0.01）；（表1）
2.2 全血SOD活性和血清MDA含量的变化（表2） 与对照组相比，各组SOD活力下降，MDA含量升高（P <0.01）；氨氯地平、辛伐他汀组SOD活力较模型组升高有显著性差异（P <0.01），而MDA则显著低于模型组（P <0.01）。
2.3主动脉斑块面积变化 正常对照组各实验兔斑块面积为零。实验组均出现面积大小不等的不规则着色区。氨氯地平组和他汀组AS斑块面积明显低于模型组（P <0.01）（表2）。
3 讨论
动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是多种危险因素引发的一种慢性、进行性的疾病过程。大量研究显示氧化损伤在AS发生、发展中起重要作用。高胆固醇血症时，自由基释放系统激活，超氧阴离子（O2-）等活性氧大量生成[1]，引起局部脂质过氧化损伤，大量的LDL被氧化，同时细胞内氧化应激信号选择性诱导炎症相关基因表达，推动AS发展[2]。可见，改善血管壁的氧化状态，抗氧化损伤是防治AS的重要环节。
氨氯地平是二氢吡啶类钙通道阻滞剂，近年来大量研究显示氨氯地平可能通过抗炎、改善内皮功能、稳定斑块等多种机制发挥抗AS作用。其独特的化学结构和钙通道阻滞作用，被认为具有抗氧化性质[3]。超氧化物歧化酶（SOD）是体内抗氧化系统中重要的酶，可以歧化氧离子，并进一步转化为水和氧气，维持机体正常的生理功能，免受自由基损伤。丙二醛（MDA）则是脂质过氧化产物之一，常用来反映机体的脂质过氧化程度，一定情况下代表了体内过氧化损伤的程度。本研究显示，模型组SOD活力明显降低，MDA含量显著升高，表明高胆固醇血症损伤了动脉壁的抗氧化机能，抗氧化系统酶活性下降，导致脂质过氧化物清除障碍，其分解代谢产物MDA含量增加，加重局部的损伤[4]。氨氯地平组SOD活力较模型组显著升高（P <0.01），而MDA含量明显下降（P <0.01）。同时辛伐他汀组SOD活力升高和MDA水平下降，这一结果与Chen L研究结果一致[5]。表明氨氯地平与辛伐他汀改善动脉壁的抗氧化能力，具有抗氧化损伤的作用。通过血脂检测显示辛伐他汀组TC、TG、LDL-C水平下降，而氨氯地平组TC、LDL-C、TG水平与模型组比较无明显差异（P >0.05），说明其抗氧化损伤作用与血脂水平无关。
本研究同时观察了药物对AS斑块面积的影响，发现药物组斑块面积较模型组明显减少（P<0.01），提示氨氯地平延缓AS进程。其抗AS作用并非经降血脂起作用，抗氧化损伤可能是其抗AS重要机制。
参考文献：
[1] Zhijun Ou，Jingsong Ou，Allan W.Ackerman，et al. L-4F，an apolipoprotein A-1 minetic，restores nitric oxide and superoxide anion balance in low-density lipoprotein-treated endothelial cells[J]. Circulation， 2003， 107： 1520-1524.
[2] David Harrison， Kathy K. Griendling， Ulflandmesser， et al. Role of oxidative stress in atherosclerosis[J]. Am J Cardiol， 2003， 9（3A）： 7A-11A.
[3] Toma L， Stancu CS， Sanda GM， et al. Anti-oxidant and anti-inflammatory mechanisms of amlodipine action to improve endothelial cell dysfunction induced by irreversibly glycated LDL[J]. Biochem Biophys Res Commun， 2011， 411（1）： 202-207.
[4] Keaney J F， Jr Vita JA. Atherosclerosis， oxidative stress， and antioxidant protection[J]. Prog Cardiovasc Dis， 1995， 38（2）： 129-148.
[5] Chen L， Haught WH， Yang B， et al. Preservation of endogenous antioxidant activity and inhibition of lipid peroxidation as common mechanisms of antiatherosclerotic effects of vitamin E， lovastatin and amlodipine[J]. J Am Coll Cardiol， 1997， 30（2）： 569-575.
【关键词】氨氯地平；动脉粥样硬化；氧化损伤；辛伐他汀
【文章编号】1004-7484（2014）02-0717-02
氨氯地平是广泛用于临床的第三代新型长效l，4-二氢吡啶类钙通道阻滞剂（calcium channel blockers，CCB）。近年来，许多研究资料提出氨氯地平在不降低血脂及血压的条件下，可能通过抗氧化、减少炎性因子及细胞因子的生成，延缓AS进程，但确切机制仍不清楚。本文通过动物试验观察食饵性兔SOD-MDA系统的变化及氨氯地平对SOD-MDA系统的影响。
1 材料和方法
1.1 实验分组及造模 健康雄性纯种新西兰白兔24只，体重2.25±0.33kg，3个月龄。实验前适应性饲养10天。随机分为4组：⑴正常对照组（n=6）：基础颗粒饲料120～150g/天；⑵AS模型组（n=6）：造膜饲料（基础颗粒饲料+2%猪油+1%胆固醇）；⑶氨氯地平组（n=6）：造模饲料+氨氯地平；⑷辛伐他汀组（n=6）：造模饲料+辛伐他汀。各组动物分别在实验前经耳中央动脉和24周实验结束时经心腔采血检验。
1.2血清总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定 采血后立即分离血清，采用酶比色法检测。
1.3血清丙二醛（MDA）测定 采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒通过硫代巴比妥酸法检测。
1.4 全血超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力测定 羟胺法检测。每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个活力单位。
1.5 兔主动脉AS面积测定 于实验24周末，在10%水合氯醛麻醉下，取各组动物主动脉标本（由主动脉弓至腹主动脉分叉处），剥去外膜脂肪及结缔组织，纵向剖开，生理盐水冲洗后置于10%中性福尔马林中固定。标本经苏丹IV染色后应用图象分析仪测定主动脉内膜脂质斑块面积百分比。
1.6 统计学处理：采用SPSS11.5统计软件分析数据。全部数据以均数±标准差（ ）表示，用one-way ANOVA进行统计学处理，组间比较用Student-Newman-Keuls法检验，P <0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 血脂水平测定结果 氨氯地平组较对照组血清TC、LDL-C、TG明显升高（P <0.01）；氨氯地平组TC、LDL-C、TG与模型组无明显差异（P >0.05）；氨氯地平组TC、LDL-C、TG水平高于辛伐他汀组（P <0.01）；（表1）
2.2 全血SOD活性和血清MDA含量的变化（表2） 与对照组相比，各组SOD活力下降，MDA含量升高（P <0.01）；氨氯地平、辛伐他汀组SOD活力较模型组升高有显著性差异（P <0.01），而MDA则显著低于模型组（P <0.01）。
2.3主动脉斑块面积变化 正常对照组各实验兔斑块面积为零。实验组均出现面积大小不等的不规则着色区。氨氯地平组和他汀组AS斑块面积明显低于模型组（P <0.01）（表2）。
3 讨论
动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是多种危险因素引发的一种慢性、进行性的疾病过程。大量研究显示氧化损伤在AS发生、发展中起重要作用。高胆固醇血症时，自由基释放系统激活，超氧阴离子（O2-）等活性氧大量生成[1]，引起局部脂质过氧化损伤，大量的LDL被氧化，同时细胞内氧化应激信号选择性诱导炎症相关基因表达，推动AS发展[2]。可见，改善血管壁的氧化状态，抗氧化损伤是防治AS的重要环节。
氨氯地平是二氢吡啶类钙通道阻滞剂，近年来大量研究显示氨氯地平可能通过抗炎、改善内皮功能、稳定斑块等多种机制发挥抗AS作用。其独特的化学结构和钙通道阻滞作用，被认为具有抗氧化性质[3]。超氧化物歧化酶（SOD）是体内抗氧化系统中重要的酶，可以歧化氧离子，并进一步转化为水和氧气，维持机体正常的生理功能，免受自由基损伤。丙二醛（MDA）则是脂质过氧化产物之一，常用来反映机体的脂质过氧化程度，一定情况下代表了体内过氧化损伤的程度。本研究显示，模型组SOD活力明显降低，MDA含量显著升高，表明高胆固醇血症损伤了动脉壁的抗氧化机能，抗氧化系统酶活性下降，导致脂质过氧化物清除障碍，其分解代谢产物MDA含量增加，加重局部的损伤[4]。氨氯地平组SOD活力较模型组显著升高（P <0.01），而MDA含量明显下降（P <0.01）。同时辛伐他汀组SOD活力升高和MDA水平下降，这一结果与Chen L研究结果一致[5]。表明氨氯地平与辛伐他汀改善动脉壁的抗氧化能力，具有抗氧化损伤的作用。通过血脂检测显示辛伐他汀组TC、TG、LDL-C水平下降，而氨氯地平组TC、LDL-C、TG水平与模型组比较无明显差异（P >0.05），说明其抗氧化损伤作用与血脂水平无关。
本研究同时观察了药物对AS斑块面积的影响，发现药物组斑块面积较模型组明显减少（P<0.01），提示氨氯地平延缓AS进程。其抗AS作用并非经降血脂起作用，抗氧化损伤可能是其抗AS重要机制。
参考文献：
[1] Zhijun Ou，Jingsong Ou，Allan W.Ackerman，et al. L-4F，an apolipoprotein A-1 minetic，restores nitric oxide and superoxide anion balance in low-density lipoprotein-treated endothelial cells[J]. Circulation， 2003， 107： 1520-1524.
[2] David Harrison， Kathy K. Griendling， Ulflandmesser， et al. Role of oxidative stress in atherosclerosis[J]. Am J Cardiol， 2003， 9（3A）： 7A-11A.
[3] Toma L， Stancu CS， Sanda GM， et al. Anti-oxidant and anti-inflammatory mechanisms of amlodipine action to improve endothelial cell dysfunction induced by irreversibly glycated LDL[J]. Biochem Biophys Res Commun， 2011， 411（1）： 202-207.
[4] Keaney J F， Jr Vita JA. Atherosclerosis， oxidative stress， and antioxidant protection[J]. Prog Cardiovasc Dis， 1995， 38（2）： 129-148.
[5] Chen L， Haught WH， Yang B， et al. Preservation of endogenous antioxidant activity and inhibition of lipid peroxidation as common mechanisms of antiatherosclerotic effects of vitamin E， lovastatin and amlodipine[J]. J Am Coll Cardiol， 1997， 30（2）： 569-575.