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目的研究1种高纯度牛凝血酶的制备工艺。方法采用不同终浓度的Ba^2＋吸附、硫酸铵分段盐析从牛血浆中提取凝血酶原,用Ca^2＋激活,活化的凝血酶用CM-Sepharose Fast Flow离子交换柱纯化。结果用冷冻1周血浆制备的凝血酶粗品产量、比活明显高于来自新鲜血浆的粗品;Ba^2＋终浓度在0.107 mol/L以上时凝血酶的产量较高;凝血酶原的最佳激活条件为：Ca^2＋终浓度0.05 mol/L,37℃,30～60 min;CM-Sepharose Fast Flow柱制备的凝血酶比活达到2 000