【摘 要】
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利用RT-PCR技术,以SVDV HK'70为材料,扩增出VP2基因抗原区.将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T-1进行连接,转化BL21菌体并
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室,中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室,西北农林科技大学动物科技学院
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划)
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利用RT-PCR技术,以SVDV HK'70为材料,扩增出VP2基因抗原区.将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T-1进行连接,转化BL21菌体并提质粒,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX-VP2,并测序.测序结果表明,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确,表达载体构建成功.将含有阳性质粒的BL21菌液经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析,出现预期的目的蛋白条带,此目的蛋白经Western blot检测确定其有免疫活性.
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