评价亚甲蓝对过氧化氢(H₂O₂)诱导小鼠巨噬细胞线粒体途径凋亡的影响。

小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基，采用随机数字表法分为6组(n＝24)：对照组(C组)、H₂O₂组、不同浓度亚甲蓝预防性给药组(MB_1，2组)和不同浓度亚甲蓝治疗性给药组(MB_3，4组)。H₂O₂组在培养基中加入50 μmol/L H₂O₂；MB_1，2组于加入H₂O₂前30 min时、MB_3，4组于加入H₂O₂后30 min时在培养基中加入亚甲蓝，终浓度分别为0.1 μmol/L(MB₁组和MB₃组)和1.0 μmol/L(MB₂组和MB₄组)。于各组培养或孵育24 h时，采用噻唑蓝比色法测定细胞存活率，采用DHE荧光探针法测定细胞ROS活性，采用分光光度计测定上清液LDH活性，采用比色法测定细胞SOD活性，采用罗丹明123染色法测定线粒体膜电位(MMP)，采用ATP生物发光法测定ATP含量，采用Western blot法检测caspase-3前体及剪切体P20蛋白和P18蛋白表达，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。

与C组比较，其余5组细胞存活率、SOD活性、MMP和ATP含量降低，ROS活性和上清液LDH活性升高，caspase-3前体及剪切体P20蛋白和P18蛋白表达上调，早期凋亡率和晚期凋亡率升高(P<0.05)。与H₂O₂组比较，MB_1-4组细胞存活率、SOD活性、MMP和ATP含量升高，ROS活性和上清液LDH活性降低，caspase-3前体及剪切体P20蛋白和P18蛋白表达下调，早期凋亡率和晚期凋亡率降低(P<0.05)。与MB₁组比较，MB₂组细胞存活率降低，caspase-3剪切体P18蛋白表达下调，MB₃组细胞存活率和SOD活性降低，ROS活性增高(P<0.05)。与MB₄组比较，MB₂组caspase-3剪切体P18蛋白表达下调，早期凋亡率和晚期凋亡率降低，ROS活性升高，MB₃组ROS活性升高(P<0.05)。

亚甲蓝减轻H₂O₂诱导小鼠巨噬细胞氧化损伤的机制与抑制线粒体途径凋亡有关。