【摘 要】
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目的 制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体.方法 应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体.亲和层析纯化抗体蛋白；ELISA测定抗
【机 构】
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军事医学科学院毒物药物研究所军事毒理及生化药理研究室,北京军区总医院
【基金项目】
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国家重点基础研究发展规划(973计划);国家重大新药创制专项;国家自然科学基金
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目的 制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体.方法 应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体.亲和层析纯化抗体蛋白；ELISA测定抗体滴度.纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231[p53(mutant)]和[H1299,p53(null)]肿瘤细胞系,Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性.结果 对筛选到的3株单克隆抗体1P15,2P37和3P40,进行了亲和层析技术纯化.SDS-PAGE结果显示,纯化后的3株抗体纯度均在90%以上；ELISA滴度测定结果显示,3株单抗的滴度均在1∶6000以上.免疫印迹结果表明,3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度,其中3P40的灵敏度最高,可以达到5 ng.Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示,抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性,说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白,而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时,没有非特异性结合.结论 成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体,其中3P40的抗体滴度和灵敏度最佳.
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