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根据GenBank中发表的E.coli K88、K99基因序列,分别设计合成1对引物。利用PCR技术,以大肠杆菌C83907和C83644的质粒为模板分别扩增不合信号肽的K88及K99基因。通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化,构建了含K88-K99串联表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pETK88CK99)。结果显示,经酶切、PCR鉴定和DNA序列分析,证实了构建的重组质粒pETK88CK99中舍有K88K99融合基因,且基因序列和阅读框架均正确。经过SDS-PAGE分析,串联表达蛋白含