CsWRKY22启动子的克隆及响应柑橘溃疡病菌侵染的表达特征

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由柑橘黄单胞杆菌致病变种Xanthomonas citri subsp.citri(Xcc)引起的柑橘溃疡病重危害着柑橘产业的健康可持续发展。改良柑橘品种对溃疡病抗性是最经济和有效的防控措施。我们前期研究表明,CsWRKY22基因可能是溃疡病的一个感病基因。本研究从晚锦橙(Citrus sinensis Osbeck)中克隆了CsWRKY22的两个等位启动子pCsWRKY22-1和pCsWRKY22-2,长度分别为1 428和1 406 bp。序列分析表明两个等位启动子序列一致性为91.76%。启动子顺式作用元件分析表明,两个等位启动子含有多种参与植物防御反应和生长发育的顺式作用元件,相同元件的数目和位置基本一致。不同的是,在TATA-box下游,pCsWRKY22-1含有两个22 bp长的TA-rich转录增强序列,而pCsWRKY22-2只含有一个。为进一步分析CsWRKY22启动子的功能,构建CsWRKY22启动子控制GUS报告基因的植物表达载体pCsWRKY22::GUS,并用农杆菌介导法转化晚锦橙,经GFP活性检测和PCR鉴定获得pCsWRKY22-1::GUS和pCsWRKY22-2::GUS转基因植株各8株和4株。GUS组织化学染色、GUS酶活性及定量PCR分析表明,CsWRKY22启动子具有较强的机械损伤和Xcc病原菌诱导活性,同时具有一定水平的基础表达特性。pCsWRKY22-1伤诱导活性高于pCsWRKY22-2,而pCsWRKY22-2溃疡病诱导活性高于pCsWRKY22-1。本研究为进一步开展CsWRKY22基因调控柑橘响应溃疡病菌侵染分子机制和柑橘溃疡病抗性改良研究提供了理论和物质基础。
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