【摘 要】
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目的 建立能稳定表达红色荧光真核表达载体(PAsRed2-N1-LC3)基因的大鼠肺泡上皮细胞株(CCL149).方法 构建PAsRed2-N1-LC3,应用转染技术将该质粒导入CCL149细胞,筛选出可稳定
【机 构】
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430060,武汉大学人民医院胸外科
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目的 建立能稳定表达红色荧光真核表达载体(PAsRed2-N1-LC3)基因的大鼠肺泡上皮细胞株(CCL149).方法 构建PAsRed2-N1-LC3,应用转染技术将该质粒导入CCL149细胞,筛选出可稳定表达的细胞株.真核细胞中PAsRed2-N1-LC3的表达分别用荧光显微镜、聚合酶链反应(PCR)测序及Western blot法检测,观察稳定表达细胞株缺氧性自噬.结果 成功获得4株可稳定表达PAsRed2-N1-LC3的细胞株,在倒置荧光显微镜下观察CCL149 PAsRed2-N1-LC3转染细胞株的红色荧光率在90％[(91.13±1.85)％]以上.Western blot结果证实在缺氧条件下,CCL149PAsRed2-N1-LC3转染细胞株的LC3相对表达量[LC3/β-肌动蛋白(β-actin)]为0.61670±0.033 94,正常细胞LC3相对表达量(LC3/β-actin)为0.16000 ±0.00635,差异有统计学意义(P＜0.05),且实验组LC3表达率平均是对照组的3.854倍;运用PCR技术检测CCL149 PAsRed2-N1-LC3转染细胞株的LC3基因相对扩增量是正常CCL149细胞LC3基因相对扩增量的4.289 863倍.结论 用含有PAsRed2-N1-LC3真核表达载体转染CCL149细胞,可成功建立PAsRed2-N1-LC3稳定表达细胞株.
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