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为提高DHA藻油在食品应用中的稳定性，本研究制备了一种新型的藻油双层纳米乳液。基于层层自组装原理，选用乳清分离蛋白（WPI）和阿拉伯胶（GA）分别作为纳米乳液的内层和外层包材，通过高压均质制备了DHA藻油双层纳米乳液。对制备纳米乳液工艺参数进行考察，并探究其理化稳定性。结果表明：WPI质量分数为1.5%，GA质量分数为2.5%，内外层乳化剂体积比3:7，DHA藻油质量分数为1.5%，均质压力为50MPa，均质3次，此时双层纳米乳液的粒径最小为354 nm，多分散系数最低0.222，Zeta电位绝对值较高为-25mV。对制备的乳液分析其热稳定性、冻融稳定性、对盐的耐受性、对酸碱的耐受性以及贮藏稳定性，结果表明双层乳液在上述各种环境压力下，均表现出较高的理化稳定性。