【摘 要】
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目的:探讨人肾上皮细胞293T中let-7a对靶基因UHRF1的负性调控作用.方法:运用生物信息学技术对let-7a靶基因进行预测和分析.构建含有UHRF1 3’UTR全长的野生型(pmiR-RB-UHRF1-
【机 构】
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重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室; 重庆医科大学生物信息学教研室; 重庆医科大学实验教学中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(81270912);重庆市科委一般项目(cstc2013jcyjA10044)
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目的:探讨人肾上皮细胞293T中let-7a对靶基因UHRF1的负性调控作用.方法:运用生物信息学技术对let-7a靶基因进行预测和分析.构建含有UHRF1 3’UTR全长的野生型(pmiR-RB-UHRF1-3’UTR-wt)和突变型荧光素酶报告质粒(pmiR-RB-UHRF1-3’UTR-mut),分别将pmiR-RB-UHRF1-3’UTR-wt,pmiR-RB-UHRF1-3’UTRmut,pmiR-RB-REPORT vector与let-7amimics或mimics control共转染293T细胞,双荧光素酶报告系统检测转染后293T细胞的荧光素酶表达水平.293T细胞分别转染let-7amimics和inhibitor,western blot和real-time RT PCR检测UHRF1基因的表达.结果:生物信息学结果显示let-7a有48个预测靶基因,包括UHRF1,HMGA2,MAPK6等,主要涉及microRNA在肿瘤、细胞周期、PI3K-AKT、p53等信号通路.其中UHRF1 3’UTR含有一个let-7a的结合位点,且在多个物种中呈高度保守.进一步双荧光素酶检测发现,共转染let-7amimics和pmiR-RBUHRF1-3’UTR-wt的293T细胞荧光素酶活性显著降低(p<0.01).Western blot和real-time RT PCR结果显示转染let-7amimics的293T细胞UHRF1表达降低,而转染let-7ainhibitor的293T细胞UHRF1表达增高.结论:人肾上皮细胞293T中let-7a能通过与UHRF13’UTR靶向结合,负性调控UHRF1的表达.
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