盐酸氯苯胍又叫1,3－双(对氯苯叉氨基)胍盐酸盐，属胍基衍生物。分子式为：C15H13C12N5·HCI；分子量为360.67。本品为白色或淡黄色结晶性粉末，无臭，味苦；遇光色渐变深，在乙醇中略溶。在氯仿中极微溶解，在水和乙醚中几乎不容，在冰醋酸中略溶。广泛用于禽、兔球虫病的防治。《中国兽药典》2005版第一部已收载，其含量测定为酸碱滴定法，而制剂采用分光光度法，两种方法都存在各种缺点，比如取样大、终点不易判定、平行性不好、颜色干扰等。本实验采用高效液相法，具有取样少、回收率高、灵敏度高、平行性好、易于操作等优点。
　　
　　1　试验部分
　　
　　①仪器与试剂。LC-10AD vp型高效液相色谱仪，SPD-IOAvp型紫外检测器，KH5200B型超声波清洗器；1％盐酸甲醇：取500mL甲醇，加入5mL盐酸；2.5％磷酸溶液：取300mL水，加入7.5 mL磷酸。
　　甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水为去离子水(电阻率为18MΩ·cm)，甲醇和水均超声脱气后使用。
　　②色谱条件。SHIMADZU C8色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇和2.5％的磷酸溶液以体积比75：25的混合液为流动相，流速为1.0mL/min。柱温为室温，检测波长为352nm，进样量20μL。
　　③试验方法。取盐酸氯苯胍0.1g，用1％的盐酸甲醇超声30min。冷却至室温。用盐酸甲醇定容并稀释至40mg/L，经0.45μm有机虑膜过滤，在色谱条件下分离、测定，采用色谱峰的保留时间进行定性，峰面积进行定量。
　　
　　
　　2　结果与讨论
　　
　　①测定波长的选择。取盐酸氯苯胍适量，用盐酸甲醇制成约10mg/L的溶液，以盐酸甲醇为空白，用752型分光光度计于300～400nm范围内扫描，在352±1nm波长处有最大吸收，但是综合考虑吸收强度和流动相的截止波长。选择317nm为测定波长。
　　②提取溶剂的选择。称取样品0.1000g。分别加入甲醇、盐酸甲醇100mL进行提取试验。结果表明：以甲醇作为溶剂时，峰形托尾严重；以盐酸甲醇作为提取溶剂时，分离效果较好，因此选择盐酸甲醇作为提取溶剂。
　　③流动相的选择。试验结果选择以甲醇和2.5％的磷酸溶液以体积比75：25的混合液为流动相。系统压力2923Pa，峰形对称，没有杂质干扰。
　　④标准曲线。按试验方法配成1、10、20、40、80、100mg/L盐酸氯苯胍标准系列溶液，进样20μL进行测定。将其所得的峰面积值与对应的标准溶液浓度作直线回归。求得回归方程为Y=54557X 27341，相关系数为0.9995。
　　⑤方法的回收率。在样品中加入20 mg/L盐酸氯苯胍溶液，按试验条件进行回收试验。方法的平均回收率(n=6)为95.2％。
　　⑥样品分析比较。取3批样品分别用《中国兽药典》标准方法和本试验方法进行测定，测定结果及相对标准偏差(RSD)见表1。
　　从表1可以看出，HPLC法测定结果其相对标准偏差明显小于国家标准滴定方法，说明平行性好于滴定法。而测定结果略低于滴定法但相差不大。实验中发现，滴定法沉淀产生太多干扰颜色对终点的判定，而制剂中的载体颜色也干扰吸光度。因此，采用高效液相色谱法更快速、准确、易于操作。