【摘 要】
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背景与目的Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了。本研究旨在构建人Raf基因全长(
【机 构】
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四川大学华西医院肺癌分子生物学重点实验室,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室 天津市肺癌研究所,天津医科大学总医院,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津市肺癌研究所,天津医科大学总医院,天津市
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背景与目的Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了。本研究旨在构建人Raf基因全长(Raf-1),氨基端(N-Raf)及羧基端(C-Raf)真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法通过PCR方法扩增Raf-1,N-Raf和C-Raf目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,Western blot检测目的蛋白的表达。结果酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误,转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白。结论本研究成功构建了pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达,为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础。
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