【摘 要】
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依据原核生物中广泛存在的调节基因luxI保守性区域的氨基酸序列设计引物, 以牲畜链霉菌总DNA 为模板, PCR扩增出约180 bp片段. 以此为探针, 与总DNA不同酶切产物进行杂交, 最
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所
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依据原核生物中广泛存在的调节基因luxI保守性区域的氨基酸序列设计引物, 以牲畜链霉菌总DNA 为模板, PCR扩增出约180 bp片段. 以此为探针, 与总DNA不同酶切产物进行杂交, 最终获得外源基因克隆至pBluescriptSK(-) EcoRⅠ-BamHⅠ位点的重组质粒pSN1. 序列分析发现一个1 800 bp的完整ORF, (G+C)%为69. 3%, 命名为sctI. ORF上游有249 bp的AT富集区, 下游有复杂的二级结构. 凝胶滞留实验证明AT富集区有特异性的DNA结合蛋白, 且在低温聚丙烯酰胺凝胶电泳时可见"DNA弯曲"现象, 提示此AT富集区为一顺式调控元件.
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