【摘 要】
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目的 克隆表达肺炎链球菌中一个潜在β-内酰胺酶基因SP_0010并进行晶体学研究和生物信息学分析,以期阐明该蛋白的生理功能,为其疫苗研究奠定基础.方法 从数据库中查询获得肺
【机 构】
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黄山学院生命与环境科学学院,安徽黄山245041;清华大学医学院传染病研究中心
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目的 克隆表达肺炎链球菌中一个潜在β-内酰胺酶基因SP_0010并进行晶体学研究和生物信息学分析,以期阐明该蛋白的生理功能,为其疫苗研究奠定基础.方法 从数据库中查询获得肺炎链球菌TIGR4菌株基因SP_0010及其编码蛋白Sp_0010的序列信息,利用生物信息学分析软件对Sp_0010的生物学功能进行预测和分析;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导已构建的菌株Rosetta(DE3)/pET28a(+)-SP_0010中目标蛋白Sp_0010表达,经Ni2+柱亲和层析、分子筛纯化及浓缩后用晶体初筛试剂盒进行初筛,对筛出的蛋白Sp_0010晶体进行优化.结果 基因SP_0010编码422个氨基酸残基,生物信息学分析显示其编码蛋白Sp_0010具有信号肽,是一种表达后分泌至细胞外的亲水性蛋白;同源建模显示Sp_0010具有N端和C端两个结构域,且C端结构域形成具有“β-内酰胺酶折叠类似”结构;抗原表位分析表明Sp_0010含有7个优势抗原表位,具有免疫原性;晶体筛选显示Sp_0010的初试结晶条件为25％polyethylene glycol 3350,0.2 mol/L MgCl2,0.1 mol/L Hepes,pH 7.5.结论 蛋白Sp_0010可在大肠杆菌中重组表达,表达蛋白可形成晶体,这为研究其结构与功能奠定了基础.
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