【摘 要】
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目的 构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组pMD19-exon 5-exon 8载体.方法 以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和ex
【机 构】
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南华大学药物药理研究所,湖南衡阳,421001
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目的 构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组pMD19-exon 5-exon 8载体.方法 以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重叠PCR技术,将exon 5和exon 8片段进行连接,再将连接产物exon 5-exon 8片段插入pMD19-T质粒,构建成重组pMD19-exon 5-exon 8载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞DH5α进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定.结果 exon 5-exon 8片段经凝胶电泳检测,可在1 253 bp处见一清晰的目的条带,PTEN基因融合重组质粒经菌液PCR及测序结果鉴定,均与预期结果一致.结论 应用重叠PCR法将exon 5和exon 8片段进行融合,并成功构建了PTEN基因融合重组表达载体.
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