【摘 要】
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目的 建立人肝癌血管内皮细胞(TEC)分离培养方法并鉴定比较.方法 采用CD105、CD31抗体交联免疫磁珠方法优化分选TEC并传代培养;通过形态观察、功能实验、流式检测及实时聚合
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目的 建立人肝癌血管内皮细胞(TEC)分离培养方法并鉴定比较.方法 采用CD105、CD31抗体交联免疫磁珠方法优化分选TEC并传代培养;通过形态观察、功能实验、流式检测及实时聚合酶链反应(real-time PCR)等验证比较.结果 CD105+TEC呈细长"纤维条索状",CD31+TEC则呈"梭形";流式检测TEC表达CD68和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)低于5%,排除巨噬细胞和成纤维细胞污染,PCR检测CD105+TEC、CD31+TEC甲胎蛋白mRNA显著低于肿瘤细胞HepG2(P＜0.01),表达水平低于HepG2的1/8,排除肿瘤细胞污染;95%以上阳性分选细胞呈乙酰化低密度脂蛋白摄取实验阳性;增殖实验检测CD105+TEC和CD31+TEC生长48 h的吸光度值分别为0.45±0.04和0.35±0.02(P＜0.05),CD105+TEC增殖能力强于CD31+TEC;TEC在Matrigel胶中可形成毛细管网状结构,CD31+TEC强于CD105+TEC.结论 CD105、CD31抗体交联免疫磁珠分选法均可分离得到高纯度人肝癌TEC.
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