【摘 要】
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目的 建立一个检测培养MDCK细胞内MutT同源蛋白1(MTH1)基因表达的半定量RT-PCR体系.方法 细胞培养后提取总RNA,经优化RT-PCR反应检测细胞内MTH1基因的表达量.条带经Scion Imm
【机 构】
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广州医学院第一附属医院,广州,510120;山东省平度市人民医院,平度,266700
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目的 建立一个检测培养MDCK细胞内MutT同源蛋白1(MTH1)基因表达的半定量RT-PCR体系.方法 细胞培养后提取总RNA,经优化RT-PCR反应检测细胞内MTH1基因的表达量.条带经Scion Immage软件分析并与内参基因GAPDH相比,对体系的准确性、重复性和灵敏度进行分析,然后运用本体系检测流感病毒感染后MDCK细胞内MTH1的表达.结果 扩增产物经测序分析证实与GenBank中该细胞的MTH1基因序列一致;灵敏度检测发现最低可从50 ng总RNA中检出目的 基因的表达;重复性测定发现,MDCK细胞MTH1与GAPDH灰度值比值的均值为(2.02±0.09,n=10),CV值为4.31%.结论 本方法的准确性、重复性和灵敏度均较好,可用于半定量检测培养细胞尤其是MDCK细胞内MTH1 mRNA表达量.
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