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摘 要：【目的】探究五种中药材乙醇提取物对植物病原真菌的抑制作用分析。【方法】在本次探究中，我们选取了山豆根、白头翁、紫花地丁、穿心莲以及青皮五种中药材，制备其乙醇提取物，研究提取物对于马铃薯干腐病、甘蓝枯萎病、棉花枯萎病以及苹果轮纹病等多种植物真菌病的抑制作用。【结果】在本次探究中，通过实验可以发现，所选取的中药材提取液对于植物病原真菌都有不同效果的抑制作用，有的中药材乙醇提取液对某些植物病原真菌表现出了非常强烈的抑制作用。【结论】所选取的五种中药材乙醇提取液对所研究的植物病原真菌具有抑制作用，且有的中药提取液对某种植物病原真菌表现出了强烈的抑制作用，可以抑制植物真菌病的发展，有利于果蔬的生长与收获。
关键词：中药材提取物;植物病原真菌;抑制作用
植物病原真菌可以引起植物真菌病的发生，一种植物上甚至会发生几种到十几种的植物真菌病。据调查显示，植物真菌病占植物病害的比例已经达到了百分之七十到百分之八十，无论对植物本身还是对于农民的经济收益都带来了严重的伤害。一直以来，化学农药都是控制植物病害的首选手段，并且取得了良好的效果。但是近年来，随着植物病原真菌抗药性的不断增加，化学农药的有效率有了一定的下降，开发安全有效的新型抑制病原真菌的药物成为了亟待解决的问题。在之前的研究中，我们可以发现某些中药乙醇提取物对于抑制细菌有很好的作用，且毒性低安全性高，所以大家开始关注中药材乙醇提取物对于植物病原真菌的抑制作用与效果[1]。
在本次研究中，我们选择了山豆根、白头翁、紫花地丁、穿心莲以及青皮五种中药材进行了研究，通过查阅资料，可以知道上述五种中药材在抗炎、抗菌以及抗肿瘤等方面都有很好的疗效。在本次研究中，我们研究了上述五种中药材对于某些植物病原真菌的抑制作用，现将研究内容报告如下。
一、资料与方法
1 一般资料
本次探究中，选取的药物为：山豆根、白头翁、紫花地丁、穿心莲以及青皮。选取的植物病原真菌为马铃薯干腐病菌、桃褐腐病菌、甘蓝枯萎病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、番茄灰霉病菌以及小麦赤霉病菌。
2 方法
2.1中药材乙醇提取液的制备
首先将山豆根、白头翁、紫花地丁、穿心莲以及青皮五种药物进行清洗，40℃进行烘干，然后粉碎、过筛。分别选取每种药物粉末各250克，然后分別加入1500ml75%的乙醇，进行40℃超声30分钟，80℃加热回流共1小时，将上述内容重复两次。最后经过抽滤、减压蒸馏以及定容等步骤后制成储备液[2]。
2.2测定中药材乙醇提取物对于植物病原真菌的敏感度
在本次探究中，我们采用菌丝生长速率法对中药提取液对于植物病原真菌的抑制作用进行检测。首先，分别取5ml的储备液与蒸馏水加到培养基中，摇匀，分别制成加药培养基与空白培养基，进行对照。然后取菌病接种到先前制备的培养基中，置于28℃中进行培养。番茄灰霉病菌、甘蓝枯萎病菌、苹果纶纹病菌以及小麦赤霉病菌四种真菌在12小时候后每12小时进行菌落直径的测量，剩余三种植物病原真菌在36小时后每12小时进行菌落直径的测量。采用计算抑制率的公式进行抑制作用的比较与分析。
2.3观察使用中药材乙醇提取物后对于植物病原真菌形态的影响
将番茄灰霉病菌、甘蓝枯萎病菌、苹果纶纹病菌以及小麦赤霉病菌进行培养，四十八小时后进行制片与染色，然后在光学显微镜下进行观察;将剩余三种植物病原真菌进行培养，九十六小时后进行制片与染色，然后在光学显微镜下进行观察。
3 观察指标
本次的观察指标为中药材乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用以及以及其对真菌形态的影响。
4 数据分析
本次数据结果统计学分析采用SPSS14.0软件进行，计量资料采用x±s表示，采用t进行检验，计数资料采用x2进行检验。
二、结果
1 中药材乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用比较
通过探究可以发现[3]，五种中药材对于植物病原真菌均有一定的抑制作用，抑制作用的强弱各不相同。在相同浓度的情况下进行比较，青皮在甘蓝枯萎病菌跟马铃薯干腐病菌中的抑制最好，有效抑制率达到50%以上;青皮在苹果轮纹病菌跟棉花枯萎病菌中的抑制作用最好，有效抑制率达到54%以上;青皮在小麦赤霉病菌中的抑制作用最好，有效抑制率达52%以上。山豆根在番茄灰霉病菌中的抑制作用最好，有效率达50%以上。除此之外，我们可以发现穿心莲对桃褐腐病菌的抑制作用显著，有限抑制率甚至达到了75%以上。
2 中药材提取液对真菌形态的影响
通过对比使用中药材乙醇提取液前后的变化，我们可以发现在使用前后真菌的形态发生了不同程度的变化。其中，马铃薯干腐病菌菌丝出现了明显的消融断裂状态;棉花枯萎病菌菌丝出现了一定程度的弯曲以及断裂;小麦赤霉病菌跟番茄灰霉病菌的菌丝出现了扭曲以及分支增多的现象;苹果纶纹菌出现了断裂以及分支增多的现象;而桃褐腐病菌的菌丝出现了严重的扭曲现象。
三、讨论
山豆根在中药上属于清热解毒的药物，在其现代研究中发现其对金黄色葡萄球菌以及白色念珠菌具有抑制作用，对结核杆菌、皮肤致病的真菌具有抑制作用[4]。在本次的探究中，用山豆根的乙醇提取液检查对于所选取植物病原真菌的抑制作用，发现山豆根提取液对于我们所选取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，其中对于番茄灰霉病菌的抑制率达到了50%以上，抑制作用显著。
白头翁在中药上属于清热解毒的药物，在其现代研究中发现其煎剂对于寄生虫（阿米巴原虫）具有显著地抑制作用，并且研究人员通过不停地研究发现、白头翁乙醇提取液以及煎剂可以抑制金黄色葡萄球菌、白念珠菌以及伤寒杆菌[5]。在本次探究中，我们检验白头翁乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用，发现对于所选取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，没有对某一种植物病原真菌有特别的抑制作用。 紫花地丁在中药上属于清热解毒的药物，治疗毒蛇咬伤方面多有应用，在其现代研究中，发现有明显的抗菌作用，对于金黄色葡萄球菌、结核杆菌、肺炎球菌以及皮肤真菌等多种细菌真菌均具有抑制作用[6]。在本次的探究中，我们用紫丁地花乙醇提取液检验对于植物病原真菌的检验作用，发现紫丁地花乙醇提取液对于所选取的植物病原真菌均具有抑制作用，没有对某一种植物病原真菌具有特别的抑制作用。
穿心莲在中药中属于清热解毒的药物，在其现代研究中发现含有穿心莲内酯等多种化合物，其煎剂对于绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等具有很好的抑制作用[7]。在本次的探究中，我们探究了穿心莲乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用，可以发现对于所选取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，发现穿心莲乙醇提取物对于桃褐腐病菌的抑制作用尤为明显，此结论在之前的研究中首次发现，本次探究再次证明并且结论一致。
青皮在中药上属于理气药，在其现代研究中发现其成分的量与陈皮不同，但是成分与陈皮比较相似。另外通过之前的研究可以发现它具有一定的抑菌作用。在本次的探究中，我们探究了青皮乙醇提取液对于很多植物病原真菌的抑制作用都非常显著，例如甘蓝枯萎病菌、马铃薯干腐病菌的抑制作用都非常显著，抑制率均达到左右;对于棉花枯萎病菌以及苹果纶纹菌的抑制率都达到54%以上，抑菌效果良好[8]。
四、总结
近几年来，因为化学药物的滥用导致植物病原真菌的抗药性不断增加，不仅给农民带来了严重的损失与巨大的痛苦，而且还对环境带来了一定的伤害。所以，尽快研究以及使用安全有效的抑制植物病原真菌的药物成了我们现在迫切需要解决的问题。在本次探究中，我们选择了白头翁、紫花地丁、青皮、穿心莲以及山豆翁五种药物提取它们的乙醇提取液对马铃薯干腐病菌、桃褐腐病菌、甘蓝枯萎病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、番茄灰霉病菌以及小麦赤霉病菌七种植物病原真菌的抑制作用进行了探究。在探究中我们可以发现，青皮对于甘蓝枯萎病菌、棉花枯萎病菌、马铃薯干腐病菌、小麦赤霉病菌等多种植物病菌都表现出了显著的抑制作用，说明青皮的抑制谱广泛，抑制的真菌种类多。
通过本次的研究我们可以发现使用中药乙醇提取物在一定程度上对于植物病原真菌具有抑制作用，但是由于在此方面的研究还是一个新兴领域，相关研究还并不完善，所以有关于中药乙醇提取物对于植物的后续伤害尚不清楚，建议继续完善后续的研究，在效果与副作用明确后，再在社会上进行使用与推广。
【参考文献】
[1]Joash Ban Lee Tan，Yau Yan Lim. Critical analysis of current methods for assessing the in vitro antioxidant and antibacterial activity of plant extracts[J]. Food Chemistry，2015，172.
[2]裴庆慧，王玥，刘宇莹，田平芳，李映，葛喜珍.五种中药材乙醇提取物对植物病原真菌的抑制作用研究[J].食品工业科技，2016，37（15）：90-95.
[3]王彦，徐曦，张立钦，王勇军.雷帕霉素对4种植物病原真菌的抑菌活性[J].农药学学报，2016，18（03）：393-396.
[4]戴五好，钱利武，杨士友，周国勤，王丽丽.苦参、山豆根生物碱及其总碱的抑菌活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（03）：177-180.
[5]胡唐玲，施高翔，徐志慶，段强军，邵菁，汪天明，吴大强，汪长中.白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌细胞壁抑制作用研究[J].中国真菌学杂志，2018，13（05）：262-267.
[6]吴强，高燕萍.紫花地丁化学成分和药理活性研究概况[J].中国民族民间医药，2017，26（22）：35-38.
[7]刘志祥，曾超珍，张映辉.穿心莲提取物体外抗菌活性及稳定性的研究[J].北方园艺，2009（01）：105-106.
[8]杨霞，赵玉雪，朱佳敏，吴柳燕，黄安香.野核桃青皮中胡桃醌含量测定及抗菌活性研究[J/OL].应用化工：1-8[2018-11-26].https：//doi.org/10.16581/j.cnki.issn1671-3206.20181101.008.
作者简介：李德成（1982年-），男，硕士研究生，副教授，主要从事中药、中药制药教学研究。
通讯作者：刘庆燕（1981年-），女，硕士研究生，副主任医师，主要从事中医肾病治疗研究。
关键词：中药材提取物;植物病原真菌;抑制作用
植物病原真菌可以引起植物真菌病的发生，一种植物上甚至会发生几种到十几种的植物真菌病。据调查显示，植物真菌病占植物病害的比例已经达到了百分之七十到百分之八十，无论对植物本身还是对于农民的经济收益都带来了严重的伤害。一直以来，化学农药都是控制植物病害的首选手段，并且取得了良好的效果。但是近年来，随着植物病原真菌抗药性的不断增加，化学农药的有效率有了一定的下降，开发安全有效的新型抑制病原真菌的药物成为了亟待解决的问题。在之前的研究中，我们可以发现某些中药乙醇提取物对于抑制细菌有很好的作用，且毒性低安全性高，所以大家开始关注中药材乙醇提取物对于植物病原真菌的抑制作用与效果[1]。
在本次研究中，我们选择了山豆根、白头翁、紫花地丁、穿心莲以及青皮五种中药材进行了研究，通过查阅资料，可以知道上述五种中药材在抗炎、抗菌以及抗肿瘤等方面都有很好的疗效。在本次研究中，我们研究了上述五种中药材对于某些植物病原真菌的抑制作用，现将研究内容报告如下。
一、资料与方法
1 一般资料
本次探究中，选取的药物为：山豆根、白头翁、紫花地丁、穿心莲以及青皮。选取的植物病原真菌为马铃薯干腐病菌、桃褐腐病菌、甘蓝枯萎病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、番茄灰霉病菌以及小麦赤霉病菌。
2 方法
2.1中药材乙醇提取液的制备
首先将山豆根、白头翁、紫花地丁、穿心莲以及青皮五种药物进行清洗，40℃进行烘干，然后粉碎、过筛。分别选取每种药物粉末各250克，然后分別加入1500ml75%的乙醇，进行40℃超声30分钟，80℃加热回流共1小时，将上述内容重复两次。最后经过抽滤、减压蒸馏以及定容等步骤后制成储备液[2]。
2.2测定中药材乙醇提取物对于植物病原真菌的敏感度
在本次探究中，我们采用菌丝生长速率法对中药提取液对于植物病原真菌的抑制作用进行检测。首先，分别取5ml的储备液与蒸馏水加到培养基中，摇匀，分别制成加药培养基与空白培养基，进行对照。然后取菌病接种到先前制备的培养基中，置于28℃中进行培养。番茄灰霉病菌、甘蓝枯萎病菌、苹果纶纹病菌以及小麦赤霉病菌四种真菌在12小时候后每12小时进行菌落直径的测量，剩余三种植物病原真菌在36小时后每12小时进行菌落直径的测量。采用计算抑制率的公式进行抑制作用的比较与分析。
2.3观察使用中药材乙醇提取物后对于植物病原真菌形态的影响
将番茄灰霉病菌、甘蓝枯萎病菌、苹果纶纹病菌以及小麦赤霉病菌进行培养，四十八小时后进行制片与染色，然后在光学显微镜下进行观察;将剩余三种植物病原真菌进行培养，九十六小时后进行制片与染色，然后在光学显微镜下进行观察。
3 观察指标
本次的观察指标为中药材乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用以及以及其对真菌形态的影响。
4 数据分析
本次数据结果统计学分析采用SPSS14.0软件进行，计量资料采用x±s表示，采用t进行检验，计数资料采用x2进行检验。
二、结果
1 中药材乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用比较
通过探究可以发现[3]，五种中药材对于植物病原真菌均有一定的抑制作用，抑制作用的强弱各不相同。在相同浓度的情况下进行比较，青皮在甘蓝枯萎病菌跟马铃薯干腐病菌中的抑制最好，有效抑制率达到50%以上;青皮在苹果轮纹病菌跟棉花枯萎病菌中的抑制作用最好，有效抑制率达到54%以上;青皮在小麦赤霉病菌中的抑制作用最好，有效抑制率达52%以上。山豆根在番茄灰霉病菌中的抑制作用最好，有效率达50%以上。除此之外，我们可以发现穿心莲对桃褐腐病菌的抑制作用显著，有限抑制率甚至达到了75%以上。
2 中药材提取液对真菌形态的影响
通过对比使用中药材乙醇提取液前后的变化，我们可以发现在使用前后真菌的形态发生了不同程度的变化。其中，马铃薯干腐病菌菌丝出现了明显的消融断裂状态;棉花枯萎病菌菌丝出现了一定程度的弯曲以及断裂;小麦赤霉病菌跟番茄灰霉病菌的菌丝出现了扭曲以及分支增多的现象;苹果纶纹菌出现了断裂以及分支增多的现象;而桃褐腐病菌的菌丝出现了严重的扭曲现象。
三、讨论
山豆根在中药上属于清热解毒的药物，在其现代研究中发现其对金黄色葡萄球菌以及白色念珠菌具有抑制作用，对结核杆菌、皮肤致病的真菌具有抑制作用[4]。在本次的探究中，用山豆根的乙醇提取液检查对于所选取植物病原真菌的抑制作用，发现山豆根提取液对于我们所选取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，其中对于番茄灰霉病菌的抑制率达到了50%以上，抑制作用显著。
白头翁在中药上属于清热解毒的药物，在其现代研究中发现其煎剂对于寄生虫（阿米巴原虫）具有显著地抑制作用，并且研究人员通过不停地研究发现、白头翁乙醇提取液以及煎剂可以抑制金黄色葡萄球菌、白念珠菌以及伤寒杆菌[5]。在本次探究中，我们检验白头翁乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用，发现对于所选取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，没有对某一种植物病原真菌有特别的抑制作用。 紫花地丁在中药上属于清热解毒的药物，治疗毒蛇咬伤方面多有应用，在其现代研究中，发现有明显的抗菌作用，对于金黄色葡萄球菌、结核杆菌、肺炎球菌以及皮肤真菌等多种细菌真菌均具有抑制作用[6]。在本次的探究中，我们用紫丁地花乙醇提取液检验对于植物病原真菌的检验作用，发现紫丁地花乙醇提取液对于所选取的植物病原真菌均具有抑制作用，没有对某一种植物病原真菌具有特别的抑制作用。
穿心莲在中药中属于清热解毒的药物，在其现代研究中发现含有穿心莲内酯等多种化合物，其煎剂对于绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等具有很好的抑制作用[7]。在本次的探究中，我们探究了穿心莲乙醇提取液对于植物病原真菌的抑制作用，可以发现对于所选取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，发现穿心莲乙醇提取物对于桃褐腐病菌的抑制作用尤为明显，此结论在之前的研究中首次发现，本次探究再次证明并且结论一致。
青皮在中药上属于理气药，在其现代研究中发现其成分的量与陈皮不同，但是成分与陈皮比较相似。另外通过之前的研究可以发现它具有一定的抑菌作用。在本次的探究中，我们探究了青皮乙醇提取液对于很多植物病原真菌的抑制作用都非常显著，例如甘蓝枯萎病菌、马铃薯干腐病菌的抑制作用都非常显著，抑制率均达到左右;对于棉花枯萎病菌以及苹果纶纹菌的抑制率都达到54%以上，抑菌效果良好[8]。
四、总结
近几年来，因为化学药物的滥用导致植物病原真菌的抗药性不断增加，不仅给农民带来了严重的损失与巨大的痛苦，而且还对环境带来了一定的伤害。所以，尽快研究以及使用安全有效的抑制植物病原真菌的药物成了我们现在迫切需要解决的问题。在本次探究中，我们选择了白头翁、紫花地丁、青皮、穿心莲以及山豆翁五种药物提取它们的乙醇提取液对马铃薯干腐病菌、桃褐腐病菌、甘蓝枯萎病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、番茄灰霉病菌以及小麦赤霉病菌七种植物病原真菌的抑制作用进行了探究。在探究中我们可以发现，青皮对于甘蓝枯萎病菌、棉花枯萎病菌、马铃薯干腐病菌、小麦赤霉病菌等多种植物病菌都表现出了显著的抑制作用，说明青皮的抑制谱广泛，抑制的真菌种类多。
通过本次的研究我们可以发现使用中药乙醇提取物在一定程度上对于植物病原真菌具有抑制作用，但是由于在此方面的研究还是一个新兴领域，相关研究还并不完善，所以有关于中药乙醇提取物对于植物的后续伤害尚不清楚，建议继续完善后续的研究，在效果与副作用明确后，再在社会上进行使用与推广。
【参考文献】
[1]Joash Ban Lee Tan，Yau Yan Lim. Critical analysis of current methods for assessing the in vitro antioxidant and antibacterial activity of plant extracts[J]. Food Chemistry，2015，172.
[2]裴庆慧，王玥，刘宇莹，田平芳，李映，葛喜珍.五种中药材乙醇提取物对植物病原真菌的抑制作用研究[J].食品工业科技，2016，37（15）：90-95.
[3]王彦，徐曦，张立钦，王勇军.雷帕霉素对4种植物病原真菌的抑菌活性[J].农药学学报，2016，18（03）：393-396.
[4]戴五好，钱利武，杨士友，周国勤，王丽丽.苦参、山豆根生物碱及其总碱的抑菌活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（03）：177-180.
[5]胡唐玲，施高翔，徐志慶，段强军，邵菁，汪天明，吴大强，汪长中.白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌细胞壁抑制作用研究[J].中国真菌学杂志，2018，13（05）：262-267.
[6]吴强，高燕萍.紫花地丁化学成分和药理活性研究概况[J].中国民族民间医药，2017，26（22）：35-38.
[7]刘志祥，曾超珍，张映辉.穿心莲提取物体外抗菌活性及稳定性的研究[J].北方园艺，2009（01）：105-106.
[8]杨霞，赵玉雪，朱佳敏，吴柳燕，黄安香.野核桃青皮中胡桃醌含量测定及抗菌活性研究[J/OL].应用化工：1-8[2018-11-26].https：//doi.org/10.16581/j.cnki.issn1671-3206.20181101.008.
作者简介：李德成（1982年-），男，硕士研究生，副教授，主要从事中药、中药制药教学研究。
通讯作者：刘庆燕（1981年-），女，硕士研究生，副主任医师，主要从事中医肾病治疗研究。