【摘 要】
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目的 原核表达猪圆环病毒2b亚型(porcine circovirus subtype 2b,PCV2b)Cap融合蛋白,并分析其免疫原性.方法 以PCV2 毒株(CAU0673)基因组为参考序列,His-Sumo-PCV2b-Cap-pUC5
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046;开江县动物疫病预防控制中心,四川达州636250
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目的 原核表达猪圆环病毒2b亚型(porcine circovirus subtype 2b,PCV2b)Cap融合蛋白,并分析其免疫原性.方法 以PCV2 毒株(CAU0673)基因组为参考序列,His-Sumo-PCV2b-Cap-pUC57 重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR 扩增目的片段;将其产物克隆至pMAL-C4x 载体中,构建pC4x-PCV2b-Cap 重组质粒,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行直链淀粉树脂纯化.SDS-PAGE 分析目的蛋白的可溶性,Western blot检测其反应原性;以纯化的融合蛋白免疫BALB/c 小鼠,Western blot 检测小鼠血清抗体特异性.结果 经双酶切及测序鉴定,重组质粒pC4x-PCV2b-Cap 构建正确;融合蛋白MBP-Cap(matlose binding protein Cap)最适诱导条件为1 mmol/L IPTG37℃诱导6 h,其以可溶性形式存在,相对分子质量约为81 000,与PCV2b阳性猪血清、兔抗MBP-tag 多克隆抗体及免疫小鼠抗血清均可发生特异性反应.结论 成功构建了 pC4x-PCV2b-Cap 重组表达载体,获得了可溶性的MBP-Cap蛋白,其纯化蛋白具有较好的免疫原性.本文为PCV2b诊断试剂盒的研发奠定了理论基础.
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