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摘要：目的 建立复方罗汉果清肺糖浆的特征图谱，并测定其中主要成分木犀草苷、罗汉果皂苷Ⅴ的含量。方法 采用Waters Sunfire C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.8 mL/min，检测波长210 nm，柱温25 ℃，进样量10 μL。结果 15批复方罗汉果清肺糖浆HPLC特征图谱确立了10个共有峰，且相对保留时间的RSD均小于2.0%。木犀草苷、罗汉果皂苷Ⅴ分别在0.163 2～0.816 0 μg、0.730 8～3.654 0 μg范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为96.30%、95.11%，RSD分别为2.28%、2.87%。结论 HPLC特征图谱结合主要成分含量测定能更全面反映制剂内在质量，可用于复方罗汉果清肺糖浆综合质量评价。
关键词：复方罗汉果清肺糖浆;高效液相色谱法;木犀草苷;罗汉果皂苷Ⅴ;特征图谱
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2019）06-0082-04
Abstract： Objective To establish characteristic spectrum of Fufang Luohanguo Qingfei Syrup by HPLC; To determine the contents of luteoloside and mogroside Ⅴ. Methods HPLC was performed on Waters Sunfire C18 column （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） by using acetonitrile and 0.2% phosphoric acid solution as the mobile phase in gradient elution. The flow rate was 0.8 mL/min; the detection wavelength was set at 210 nm; the column temperature was 25 ℃; the injection volume was 10 μL. Results Ten common peaks were determined from the HPLC characteristic spectrum of fifteen batches of samples. The RSDs of retention time were less than 2.0%. The good linear range of luteoloside and mogroside Ⅴ was among 0.163 2–0.816 0 μg and 0.730 8–3.654 0 μg， respectively. The average recovery of sample addition was 96.30% and 95.11%， with RSD of 2.28% and 2.87%， respectively. Conclusion The HPLC characteristic spectrum combined with the content determination of main components can reflect the inherent quality of preparation more comprehensively， which can be used in the comprehensive quality evaluation of Fufang Luohanguo Qingfei Syrup.
Keywords： Fufang Luohanguo Qingfei Syrup; HPLC; luteoloside; mogroside Ⅴ; characteristic spectrum
復方罗汉果清肺糖浆由罗汉果、枇杷叶、菊花、苦杏仁等6味中药组成，具有清热化痰、润肺止咳功效，对于咳嗽痰黄、咯痰不畅、咽干舌燥等证属痰热
基金项目：广西壮族自治区工业和信息化发展专项资金（2017年）;广西科学研究与技术开发计划（桂科能1598025-46）;广西壮族自治区级大学生创新创业训练计划（201710601054、201710601055）;桂林市科学研究与技术开发计划（20150102-6、20150102-7、20150102-8）
通讯作者：顾生玖，E-mail：gushengjiu@163.com
咳嗽者具有较好疗效。复方罗汉果清肺糖浆现行标准（WS-5922（B-0922）-2014Z）仅建立了罗汉果、枇杷叶及菊花药材的薄层鉴别。该处方以罗汉果为君药，主要成分罗汉果皂苷Ⅴ具有止咳祛痰的药效作用[1]。方中菊花主要成分为木犀草苷及绿原酸类成分，具有止咳、祛痰、平喘的药效作用[2-3]。为更全面评价该产品的质量，本研究参考相关文献[4-10]，建立以处方药材特征性成分为基础的对照特征图谱，采用HPLC同时测定制剂中罗汉果皂苷Ⅴ和木犀草苷的含量，为该产品的质量标准提升奠定基础。
1 仪器与试药
1260系列高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），Milli-Q Direct 8超纯水一体化系统（美国默克密理博公司），XP404S型电子天平（瑞士Mettler公司）。
罗汉果皂苷Ⅴ对照品（批号111754-201502）、苦杏仁苷对照品（批号110820-201607）、木犀草苷对照品（批号111720-201609），中国食品药品检定研究院;乙腈为色谱纯（德国Merck公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。15批复方罗汉果清肺糖浆为桂林三金药业股份有限公司2016年3月-2017年9月留样样品。 2 特征图谱
2.1 色谱条件
采用Waters Sunfire C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;以乙腈（A）-0.2%磷酸水（B）为流动相进行梯度洗脱（0～10 min，10%→13%A;10～20 min，13%→17%A;20～47 min，17%→20%A;47～60 min，20%→23%A;60～90 min，23%→26%A;90～95 min，26%A）;流速：0.8 mL/min;柱温：25 ℃;检测波长：210 nm;进样量：10 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液的制备
取苦杏仁苷对照品、木犀草苷对照品、罗汉果皂苷Ⅴ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含苦杏仁苷30 μg、木犀草苷10 μg、罗汉果皂苷Ⅴ 40 μg的混合溶液，即得。
2.2.2 供試品溶液的制备
取复方罗汉果清肺糖浆样品150 mL，加氨水适量，调pH值至中性。精密量取5 mL，通过大孔吸附树脂柱D101（内径1 cm，柱高20 cm），以水20 mL洗脱，弃去水液，再用稀乙醇20 mL洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇20 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.3 方法学考察
取同一批复方罗汉果清肺糖浆样品（批号170206），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以木犀草苷峰（4号峰）为参照峰，结果精密度试验各共有峰相对保留时间的RSD介于0.04%～0.49%，稳定性试验各共有峰相对保留时间的RSD介于0.05%～0.49%，重复性试验各共有峰相对保留时间的RSD介于0.06%～0.49%，均小于2.0%，表明该方法的精密度、稳定性、重复性良好。
2.4 特征图谱的建立及共有峰指认
取15批复方罗汉果清肺糖浆样品适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》进行分析、比较，经多点校正和自动匹配后，生成对照特征图谱。共标定10个共有峰，选定这10个峰进行峰匹配，建立复方罗汉果清肺糖浆HPLC特佂图谱。
4号峰为木犀草苷峰，出峰时间适中，峰形较好，含量相对较高，故选择以木犀草苷峰为对照峰，其他9个色谱峰的相对保留时间分别为0.434 5、0.463 1、0.931 2、1.298 5、1.339 1、1.458 5、1.663 0、1.987 1、2.253 4，各共有峰相对保留时间的RSD介于0.09%～0.79%，均小于2.0%。15批复方罗汉果清肺糖浆样品HPLC叠加图见图1。
2.5 色谱峰归属分析
取本品（批号170206）及苦杏仁、罗汉果、菊花饮片适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，通过各峰的保留时间和紫外吸收光谱对比分析，确定峰的归属。10个共有峰中，1号峰来自苦杏仁，2、8号峰来自罗汉果，3、4、5、6、7、9、10号峰来自菊花。色谱图见图4。
3 指标成分含量测定
3.1 溶液的制备
3.1.1 混合对照品溶液的制备
取木犀草苷对照品、罗汉果皂苷Ⅴ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含木犀草苷0.04 mg、罗汉果皂苷Ⅴ 0.18 mg的混合对照品溶液，即得。
3.1.2 供试品溶液的制备
取复方罗汉果清肺糖浆样品150 mL，加氨水适量，调pH值至中性。精密量取5 mL，通过MCI GEL CHP 20柱（内径1 cm，柱高10 cm），以水20 mL洗脱，弃去水液，再用30%乙醇15 mL洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇20 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
3.1.3 阴性对照溶液的制备
按复方罗汉果清肺糖浆处方分别制备不含菊花、罗汉果的阴性样品，按“3.1.2”项下方法制备，即得。
3.2 色谱条件
同“2.1”项下色谱条件，在此条件下，各待测组分与相邻峰之间的分离度均达到要求，阴性对照在与各待测组分相同保留时间处均未出现色谱峰，见图5。
3.3 方法学考察
3.3.1 线性关系考察
精密吸取“3.1.1”项下混合对照品溶液4、8、10、12、16、20 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，得木犀草苷回归方程Y=136.8X+14.443（r=0.999 8），罗汉果皂苷Ⅴ回归方程Y=24.072X+2.871 4（r=0.999 8），表明木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ分别在0.163 2～0.816 0 μg、0.730 8～3.654 0 μg范围内呈良好的线性关系。
3.3.2 精密度试验
取“3.1.1”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，每次进样10 μL，记录峰面积，结果木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ峰面积RSD均为0.44%，表明仪器精密度良好。
3.3.3 稳定性试验 取“3.1.2”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别在0、4、8、12、18、24 h进样10 μL，记录峰面积，结果木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ峰面积RSD分别为1.26%、0.80%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
3.3.4 重复性试验
取同一批样品（批号170206）6份，按“3.1.2”项下方法平行制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，每次进样10 μL，记录峰面积，结果木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ峰面积RSD分别为1.28%、0.56%，表明该方法重复性良好。
3.3.5 加样回收率试验
精密量取已知含量的同一批样品（批号170206）2.5 mL，共6份，分别精密加入一定量木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ对照品，按“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样10 μL，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表1、表2，表明该方法回收率良好。
3.4 样品含量测定
取15批复方罗汉果清肺糖浆样品，分别按“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果表明，不同批次复方罗汉果清肺糖浆中木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ含量无明显差异，见表3。
4 讨论
本研究采用二极管阵列检测器进行全波长扫描，结果显示在210 nm波长处各色谱峰均有较好的吸收，且基线平稳。先后考察甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸等流动相系统，结果以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱时峰形较好，出峰时间合适。考虑到苦杏仁为方中臣药，且苦杏仁苷为主要止咳药效成分，尝试不同流动相体系、同类型的色谱柱均未能实现苦杏仁苷峰（1号峰）基线分离，结合文献报道[11]，干扰成分可能是L-苦杏仁苷（苦杏仁苷的差向异构体）。如何使L-苦杏仁苷和D-苦杏仁苷达到基线分离，尚待进一步研究。
供试品溶液制备时，按常规溶剂提取后直接进样分析，发现色谱图中间有信号极强的色谱峰，通过分析证实为制剂中的苯甲酸。故选择在柱层析前样品处理时，用碱液调pH值至中性，使苯甲酸形成盐，以利于洗脱除去。考察了不同类型大孔吸附树脂D101、AB-8、NKA-9及MCI GEL CHP 20柱，结果表明大孔吸附树脂D101、MCI GEL CHP 20对皂苷类成分分离、纯化效果较好。
参考文献：
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[2] GUAN R W， QU Y S， GU Z W， et al. Study on the pharmacologic action of luteoloside[J]. Medicinal Plant，2014，5（7）：5-7.
[3] 沈智，陈丽珏，张文婷，等.RP-HPLC法测定菊花中3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷和绿原酸[J].中草药，2010，41（2）：307-310.
[4] 武琳，黄菲，杨光.复方罗布麻颗粒中木犀草苷含量测定方法研究[J].中国中医药信息杂志，2015，22（4）：91-93.
[5] YAN H， TAO L， QU X， et al. Quantitative determination of mogroside V in rat plasma by LC-MS/MS and its application to a pharmacokinetic study[J]. Pak J Pharm Sci，2018，31（3）：867-873.
[6] SHEN Y， LIN S J， HAN C， et al. Rapid identification and quantification of five major mogrosides in Siraitia grosvenorii （Luo-Han-Guo） by high performance liquid chromatography-triple quadrupole linear ion trap tandem mass spectrometry combined with microwave-assisted extraction[J]. Microchemical Journal，2014， 116：142-150.
[7] 陳薇，段小群，吴卫，等.富硒罗汉果中罗汉果皂苷Ⅴ的HPLC测定[J].湖北农业科学，2015，54（2）：444-446.
[8] 师凤华，赵祥升，莫乔程，等.不同产地不同种质金银花中绿原酸和木犀草苷的含量分析[J].中药材，2014，37（7）：1145-1148.
[9] 何燕宁，赵引利，杨冬丽，等.不同产地及采收期的葎草中木犀草苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素定量比较研究[J].中草药，2016， 47（20）：3707-3711.
[10] 屠万倩，刘晓苗，张海波，等.HPLC法同时测定不同产地的菊花中8种成分的含量[J].中药材，2018，41（1）：152-155.
[11] 汤庆发，谢颖，陈飞龙，等.苦杏仁中苦杏仁苷的存在形式及其影响因素[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（8）：107-109.
（收稿日期：2018-11-27）
（修回日期：2018-12-13;编辑：陈静）
关键词：复方罗汉果清肺糖浆;高效液相色谱法;木犀草苷;罗汉果皂苷Ⅴ;特征图谱
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2019）06-0082-04
Abstract： Objective To establish characteristic spectrum of Fufang Luohanguo Qingfei Syrup by HPLC; To determine the contents of luteoloside and mogroside Ⅴ. Methods HPLC was performed on Waters Sunfire C18 column （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） by using acetonitrile and 0.2% phosphoric acid solution as the mobile phase in gradient elution. The flow rate was 0.8 mL/min; the detection wavelength was set at 210 nm; the column temperature was 25 ℃; the injection volume was 10 μL. Results Ten common peaks were determined from the HPLC characteristic spectrum of fifteen batches of samples. The RSDs of retention time were less than 2.0%. The good linear range of luteoloside and mogroside Ⅴ was among 0.163 2–0.816 0 μg and 0.730 8–3.654 0 μg， respectively. The average recovery of sample addition was 96.30% and 95.11%， with RSD of 2.28% and 2.87%， respectively. Conclusion The HPLC characteristic spectrum combined with the content determination of main components can reflect the inherent quality of preparation more comprehensively， which can be used in the comprehensive quality evaluation of Fufang Luohanguo Qingfei Syrup.
Keywords： Fufang Luohanguo Qingfei Syrup; HPLC; luteoloside; mogroside Ⅴ; characteristic spectrum
復方罗汉果清肺糖浆由罗汉果、枇杷叶、菊花、苦杏仁等6味中药组成，具有清热化痰、润肺止咳功效，对于咳嗽痰黄、咯痰不畅、咽干舌燥等证属痰热
基金项目：广西壮族自治区工业和信息化发展专项资金（2017年）;广西科学研究与技术开发计划（桂科能1598025-46）;广西壮族自治区级大学生创新创业训练计划（201710601054、201710601055）;桂林市科学研究与技术开发计划（20150102-6、20150102-7、20150102-8）
通讯作者：顾生玖，E-mail：gushengjiu@163.com
咳嗽者具有较好疗效。复方罗汉果清肺糖浆现行标准（WS-5922（B-0922）-2014Z）仅建立了罗汉果、枇杷叶及菊花药材的薄层鉴别。该处方以罗汉果为君药，主要成分罗汉果皂苷Ⅴ具有止咳祛痰的药效作用[1]。方中菊花主要成分为木犀草苷及绿原酸类成分，具有止咳、祛痰、平喘的药效作用[2-3]。为更全面评价该产品的质量，本研究参考相关文献[4-10]，建立以处方药材特征性成分为基础的对照特征图谱，采用HPLC同时测定制剂中罗汉果皂苷Ⅴ和木犀草苷的含量，为该产品的质量标准提升奠定基础。
1 仪器与试药
1260系列高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），Milli-Q Direct 8超纯水一体化系统（美国默克密理博公司），XP404S型电子天平（瑞士Mettler公司）。
罗汉果皂苷Ⅴ对照品（批号111754-201502）、苦杏仁苷对照品（批号110820-201607）、木犀草苷对照品（批号111720-201609），中国食品药品检定研究院;乙腈为色谱纯（德国Merck公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。15批复方罗汉果清肺糖浆为桂林三金药业股份有限公司2016年3月-2017年9月留样样品。 2 特征图谱
2.1 色谱条件
采用Waters Sunfire C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;以乙腈（A）-0.2%磷酸水（B）为流动相进行梯度洗脱（0～10 min，10%→13%A;10～20 min，13%→17%A;20～47 min，17%→20%A;47～60 min，20%→23%A;60～90 min，23%→26%A;90～95 min，26%A）;流速：0.8 mL/min;柱温：25 ℃;检测波长：210 nm;进样量：10 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液的制备
取苦杏仁苷对照品、木犀草苷对照品、罗汉果皂苷Ⅴ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含苦杏仁苷30 μg、木犀草苷10 μg、罗汉果皂苷Ⅴ 40 μg的混合溶液，即得。
2.2.2 供試品溶液的制备
取复方罗汉果清肺糖浆样品150 mL，加氨水适量，调pH值至中性。精密量取5 mL，通过大孔吸附树脂柱D101（内径1 cm，柱高20 cm），以水20 mL洗脱，弃去水液，再用稀乙醇20 mL洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇20 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.3 方法学考察
取同一批复方罗汉果清肺糖浆样品（批号170206），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以木犀草苷峰（4号峰）为参照峰，结果精密度试验各共有峰相对保留时间的RSD介于0.04%～0.49%，稳定性试验各共有峰相对保留时间的RSD介于0.05%～0.49%，重复性试验各共有峰相对保留时间的RSD介于0.06%～0.49%，均小于2.0%，表明该方法的精密度、稳定性、重复性良好。
2.4 特征图谱的建立及共有峰指认
取15批复方罗汉果清肺糖浆样品适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》进行分析、比较，经多点校正和自动匹配后，生成对照特征图谱。共标定10个共有峰，选定这10个峰进行峰匹配，建立复方罗汉果清肺糖浆HPLC特佂图谱。
4号峰为木犀草苷峰，出峰时间适中，峰形较好，含量相对较高，故选择以木犀草苷峰为对照峰，其他9个色谱峰的相对保留时间分别为0.434 5、0.463 1、0.931 2、1.298 5、1.339 1、1.458 5、1.663 0、1.987 1、2.253 4，各共有峰相对保留时间的RSD介于0.09%～0.79%，均小于2.0%。15批复方罗汉果清肺糖浆样品HPLC叠加图见图1。
2.5 色谱峰归属分析
取本品（批号170206）及苦杏仁、罗汉果、菊花饮片适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，通过各峰的保留时间和紫外吸收光谱对比分析，确定峰的归属。10个共有峰中，1号峰来自苦杏仁，2、8号峰来自罗汉果，3、4、5、6、7、9、10号峰来自菊花。色谱图见图4。
3 指标成分含量测定
3.1 溶液的制备
3.1.1 混合对照品溶液的制备
取木犀草苷对照品、罗汉果皂苷Ⅴ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含木犀草苷0.04 mg、罗汉果皂苷Ⅴ 0.18 mg的混合对照品溶液，即得。
3.1.2 供试品溶液的制备
取复方罗汉果清肺糖浆样品150 mL，加氨水适量，调pH值至中性。精密量取5 mL，通过MCI GEL CHP 20柱（内径1 cm，柱高10 cm），以水20 mL洗脱，弃去水液，再用30%乙醇15 mL洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇20 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
3.1.3 阴性对照溶液的制备
按复方罗汉果清肺糖浆处方分别制备不含菊花、罗汉果的阴性样品，按“3.1.2”项下方法制备，即得。
3.2 色谱条件
同“2.1”项下色谱条件，在此条件下，各待测组分与相邻峰之间的分离度均达到要求，阴性对照在与各待测组分相同保留时间处均未出现色谱峰，见图5。
3.3 方法学考察
3.3.1 线性关系考察
精密吸取“3.1.1”项下混合对照品溶液4、8、10、12、16、20 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，得木犀草苷回归方程Y=136.8X+14.443（r=0.999 8），罗汉果皂苷Ⅴ回归方程Y=24.072X+2.871 4（r=0.999 8），表明木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ分别在0.163 2～0.816 0 μg、0.730 8～3.654 0 μg范围内呈良好的线性关系。
3.3.2 精密度试验
取“3.1.1”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，每次进样10 μL，记录峰面积，结果木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ峰面积RSD均为0.44%，表明仪器精密度良好。
3.3.3 稳定性试验 取“3.1.2”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别在0、4、8、12、18、24 h进样10 μL，记录峰面积，结果木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ峰面积RSD分别为1.26%、0.80%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
3.3.4 重复性试验
取同一批样品（批号170206）6份，按“3.1.2”项下方法平行制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，每次进样10 μL，记录峰面积，结果木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ峰面积RSD分别为1.28%、0.56%，表明该方法重复性良好。
3.3.5 加样回收率试验
精密量取已知含量的同一批样品（批号170206）2.5 mL，共6份，分别精密加入一定量木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ对照品，按“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样10 μL，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表1、表2，表明该方法回收率良好。
3.4 样品含量测定
取15批复方罗汉果清肺糖浆样品，分别按“3.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果表明，不同批次复方罗汉果清肺糖浆中木犀草苷和罗汉果皂苷Ⅴ含量无明显差异，见表3。
4 讨论
本研究采用二极管阵列检测器进行全波长扫描，结果显示在210 nm波长处各色谱峰均有较好的吸收，且基线平稳。先后考察甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸等流动相系统，结果以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱时峰形较好，出峰时间合适。考虑到苦杏仁为方中臣药，且苦杏仁苷为主要止咳药效成分，尝试不同流动相体系、同类型的色谱柱均未能实现苦杏仁苷峰（1号峰）基线分离，结合文献报道[11]，干扰成分可能是L-苦杏仁苷（苦杏仁苷的差向异构体）。如何使L-苦杏仁苷和D-苦杏仁苷达到基线分离，尚待进一步研究。
供试品溶液制备时，按常规溶剂提取后直接进样分析，发现色谱图中间有信号极强的色谱峰，通过分析证实为制剂中的苯甲酸。故选择在柱层析前样品处理时，用碱液调pH值至中性，使苯甲酸形成盐，以利于洗脱除去。考察了不同类型大孔吸附树脂D101、AB-8、NKA-9及MCI GEL CHP 20柱，结果表明大孔吸附树脂D101、MCI GEL CHP 20对皂苷类成分分离、纯化效果较好。
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（收稿日期：2018-11-27）
（修回日期：2018-12-13;编辑：陈静）