【摘 要】
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为构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库,用CF-11纤维素柱快速提纯速殖子,以盐酸异硫氰酸胍(AGPC)一步法抽提总RNA,oligo-dT纤维素分离mRNA后,用ClonTech公司的Sm
【机 构】
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苏州医学院寄生虫学教研室,复旦大学生命科学院生物化学系
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为构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库,用CF-11纤维素柱快速提纯速殖子,以盐酸异硫氰酸胍(AGPC)一步法抽提总RNA,oligo-dT纤维素分离mRNA后,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒,构建了弓形虫RH株的表达型文库.获得5×106个独立克隆,重组率为90%,插入片段的平均长度约为1kb.根据已知序列设计引物,从cDNA文库中扩增出编码棒状体蛋白l(ROPl)的基因(不含编码信号肽的序列),本文库可望用于弓形虫疫苗研究的候选基因的筛选.
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