目的 观察高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(HRECs)脯氨酸羟化酶2(PHD2)的表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响.方法 将培养至融合的HRECs分为三组,分别为正常对照组、甘露醇对照组与高糖组.正常对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖,甘露醇对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇,高糖组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖.培养24、48 h后收集细胞蛋白、上清液及RNA.蛋白免疫印迹法检测细胞PHD2、缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)及紧密连接蛋白occludin的蛋白表达水平；酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的含量；实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因的转录水平；相对分子质量7×104的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖检测细胞旁通透性.结果 与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs中PHD2蛋白表达水平均先降低后升高,HIF-1α表达升高,occludin表达降低；高糖组细胞上清液中VEGF含量增加,差异均有统计学意义(PHD2:F=7.618、8.627,P＜0.05;HIF-1α:x2=7.692、7.652,P＜0.05；occludin:F=23.23、7.317,P＜0.05；VEGF:F=10.768、4.562,P＜0.05).与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs的PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因转录水平升高,差异均有统计学意义(PHD2:F=5.69、14.27,P＜0.05;HIF-1α:F=6.07、10.47,P＜0.05; VEGF:F=12.31、9.14,P＜0.05;occludin:F=8.77、8.00,P＜0.05).与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组细胞旁通透性增加,差异有统计学意义(x2=20.57、F=56.09,P＜0.05).结论 高糖诱导HRECs PHD2表达发生变化.PHD2可能在内皮细胞屏障破坏中发挥一定的调控作用,其机制与HIF-lα、VEGF有关。
高糖诱导人视网膜血管内皮细胞脯氨酸羟化酶2表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响
【摘 要】
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目的 观察高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(HRECs)脯氨酸羟化酶2(PHD2)的表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响.方法 将培养至融合的HRECs分为三组,分别为正常对照组、甘露醇对照组与高糖组.正常对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖,甘露醇对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇,高糖组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖.培养24、48 h后收集细胞蛋白、上清液
【机 构】
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510060广州,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室,510060广州,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室,510060广州,中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室,510060广州,中
【出 处】
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中华眼底病杂志
【发表日期】
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2013年29期
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