【摘 要】
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我们利用糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI)将目的蛋白锚定于细胞表面,刺激T细胞活化,为研制GPI-B7-1-肿瘤细胞膜疫苗进行技术准备[1].rn一、材料与方法rn1.细胞株:5637膀胱癌细
【机 构】
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贵州医科大学附属医院贵州省肿瘤医院泌尿外科,贵阳,550003华北煤炭医学院病理生理教研室,唐山,063000;221004,徐州医科大学肿瘤防治研究所;300211,天津医科大学第二附属医院泌尿外科
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我们利用糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI)将目的蛋白锚定于细胞表面,刺激T细胞活化,为研制GPI-B7-1-肿瘤细胞膜疫苗进行技术准备[1].rn一、材料与方法rn1.细胞株:5637膀胱癌细胞株购于北京肿瘤研究所.二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型转基因中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR-)高表达GPI-B7-1细胞株由本实验室提供.rn2.提取GPI-B7-1:培养高表达GPI-B7-1的CHO/DHFR-细胞2周,收集细胞,裂解后,11 000 g 4℃离心20 min沉降膜,溶于提取缓冲液中离心取上清.用饱和硫酸铵法沉淀蛋白,4℃透析24h,浓缩蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白.经蔗糖梯度离心后,分50管收集,测定吸光度(A)值,分别进行蛋白电泳检测目的蛋白.
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