【摘 要】
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目的 探讨IL-2 preS DNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理. 方法应用基因重组技术,构建人白细胞介素2(hIL-2)和前表面抗原(preS)的真核表达载体,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB/c小鼠和HBV转基因小鼠,通过ELISA方法检测BALB/c小鼠和HBV转基因鼠的抗-preS2、HBsAg及抗-HBs抗体水平;荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBV
【机 构】
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264000烟台,山东省干细胞工程技术研究中心,烟台毓璜顶医院中心实验室,264000烟台,山东省干细胞工程技术研究中心,烟台毓璜顶医院中心实验室,264000烟台,山东省干细胞工程技术研究中心,烟台
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目的 探讨IL-2 preS DNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理. 方法应用基因重组技术,构建人白细胞介素2(hIL-2)和前表面抗原(preS)的真核表达载体,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB/c小鼠和HBV转基因小鼠,通过ELISA方法检测BALB/c小鼠和HBV转基因鼠的抗-preS2、HBsAg及抗-HBs抗体水平;荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBV DNA拷贝数,并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度,同时检测肝功能指标. 结果①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后,100%小鼠能在第4、6周检测到抗preS1抗体,持续时间长达10周.②用IL-2 preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式,且所需质粒量(10μg/只)仅为后者(100μg/只)的1/10.③在第4周高峰期检测IgG亚类,是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应.④基因枪注射真核表达质粒(1μg/只)免疫转基因小鼠后,80%的小鼠产生了抗体,HBV DNA量下降,其中20%的小鼠HBsAg转阴.⑤HE肝组织染色显示:肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高. 结论 IL-2 preS DNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫,可部分打破小鼠机体的免疫耐受,为新型乙肝疫苗和抗HBV持续性感染的特异性免疫治疗剂的设计和构建提供理论与实践依据。
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