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目的 制备人A组轮状病毒VP4结构蛋白N端的刺突蛋白VP8卵黄抗体IgY,并检测其生物学特征。方法以轮状病毒VP4基因的DNA为模板,采用PCR方法扩增VP8 DNA序列。将VP8片段克隆到原核表达载体 pET28a 上,形成重组质粒pET28a-VP8,转化基因工程菌E.coli BL21,完成VP8重组蛋白的诱导表达。 VP8包涵体蛋白经纯化和蛋白复性后,与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡,收集鸡蛋,用水稀释-超滤法纯化卵黄抗体IgY。通过SDS-PAGE、Western blot、ELISA和点杂交等技术方法,分析该抗体的生物学特性,包括抗体的纯度、滴度、特异性和稳定性。结果 VP8在基因工程菌E.coli BL21中主要以包涵体蛋白形式表达,相对分子质量约为35×10^3,在pH8.0的Tris-HCI缓冲体系其复性效率可达90%。将重组抗原VP8免疫产蛋鸡,获得VP8抗原特异性的卵黄抗体IgY,抗体滴度达到1∶100000,且特异性地识别野生型A组轮状病毒。结论本研究采用基因工程和免疫技术制备的VP8卵黄抗体IgY,具有较高的抗体滴度和特异性,为婴幼儿轮状病毒感染性腹泻的诊断和防治提供了新的思路。