【摘 要】
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酶活性高的木聚糖酶在工业中具有巨大应用潜力,但大部分野生木聚糖酶不能耐受工业生产过程中的极端环境比如高温,因此很有必要通过分子生物学的方法改造木聚糖酶.本文通过分
【机 构】
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四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室;
【基金项目】
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国家“十二五”科技支撑计划项目(2013BAD10B01,2014BAD02B02);国家自然科学基金项目(31171447);四川省科技支撑项目(2013HH0007,2013GZX0161-3,2013GZ0058)资助~~
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酶活性高的木聚糖酶在工业中具有巨大应用潜力,但大部分野生木聚糖酶不能耐受工业生产过程中的极端环境比如高温,因此很有必要通过分子生物学的方法改造木聚糖酶.本文通过分子动力学模拟和定点突变的方法以提高黑曲霉(SCTCC400264)来源的木聚糖酶Xyn B的耐热性.利用定点突变技术获得突变载体p ET32a-Xyn B-T79V并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导成功表达木聚糖酶Xyn B-T79V.在镍亲和层析纯化蛋白后测定了突变酶的耐热性.突变体Xyn B-T79V在30、40、50℃处理120 min后酶活几乎没有损失,当处理温度升高到60-80℃时,酶活开始下降.温度升到80℃时,残余酶活仍有37%,而此时野生型Xyn B的活性几乎完全丧失.突变体Xyn B-T79V半衰期t1/2提高了8.7 min.本研究获得的突变酶Xyn B-T79V耐热性显著提高,为工业应用提供了新的酶资源.
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