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【摘要】 目的 通过观察过期妊娠患者凋亡抑制蛋白Survivin在胎盘滋养细胞层的表达，探讨滋养细胞凋亡与过期妊娠的关系。方法 采用免疫组织化学方法（S-P法）对10例过期妊娠和10例正常足月妊娠产妇的胎盘滋养细胞层Survivin表达进行检测和对比研究。结果 结果胎盘滋养细胞层Survivin表达过期妊娠组为6.67±0.45，足月妊娠组为8.83±0.67，两组比较Survivin表达差别有统计学意义(P＜0.05)。结论 胎盘滋养细胞层凋亡抑制蛋白Survivin表达减少，可能与过期妊娠有关。
【关键词】 胎盘；过期妊娠；滋养细胞；凋亡；Survivin蛋白
文章编号：1003-1383(2008)02-0255-02中图分类号：R 714.21 文献标识码：A
Study on Expression of Survivin Protein in Trophoblast Cells of Placenta of Postdate LaborCHEN Cairong1，WANG Zineng2，GUO xiaoyan1，HU Qinglan1，LIU kunping3
（1.Department of Obestetrics and Gynecology of the Fifth Affiliated Hospital of Jinan
University，Guangdong Qingyuan 511500；2.Department of Obestetrics and Gynecology of the First Affiliated Hospital of
Jinan University,Guangdong Guangzhou 510630；3.Department of pathobiology of
the FifthAffiliated Hospital of Jinan University,Guangdong Qingyuan 511500）
【Abstract】 Objective To study the relationship between postdatelabor and the trophoblast apoptosis by observing the expression of Survivin protein in the trophoblasts of placenta.
Methods Immunnohistochemistry was used to detect the expression of Survivin protein in the trophoblasts of placenta which were taken from 10 samples of postdate labor and 10 samples of full-term labor.Results The expressionin of Survivin protein in the trophoblasts of postdate labor was (PU:6.67±0.45) and in full-term labor group was (PU:8.83±0.67).The expression of Survivin protein in the trophoblasts of full-term labor was remarkably higher than that in the placenta of postdate labor. There was significant difference between them.Con
clusion Survivin may be inhibited by trophoblast apoptosis .it might be correlated with the postdate labor.
【Key words】 placenta；postdate labor；trophoblasts；apoptosis；Survivin
近年来，随着细胞凋亡现象的提出，细胞凋亡分子调节机制的逐渐阐明，妊娠与凋亡相关性的研究也逐渐受到重视。细胞凋亡是在基因调控下有新蛋白合成的主动发生的现象。许多资料表明细胞凋亡的异常可能影响妊娠的正常进展，影响胎盘功能，进而导致妊娠疾病的发生。过期妊娠患者胎盘病理改变可引起胎盘氧储备能力下降，并与胎儿缺氧有关，但引起胎盘病理改变的原因尚不清楚。明确胎盘功能降低的原因是解决不良妊娠结局的关键。本研究选取Survivin蛋白在过期妊娠胎盘滋养细胞层表达的情况，探讨胎盘细胞凋亡在过期妊娠胎盘中的作用，旨在为揭示过期妊娠的病理机制提供实验依据，更好地改善围产结局。
对象和方法
1.对象 选择于2002年12月至2003年5月在暨南大学医学院附属第五医院妇产科住院分娩的正常足月妊娠产妇10例，过期妊娠产妇10例。其中足月产组产妇年龄24～32岁，平均(27.6±3.3)岁；过期产组产妇年龄23～31岁，平均(26.8±3.1)岁。两组年龄差别无统计学意义(t=0.792，P＞0.05)。两组均除外妊娠高血压综合征(妊高征)、前置胎盘、胎盘早剥、羊水过多、胎儿宫内发育迟缓等病理妊娠,除外糖尿病、肝炎、甲亢、心脏病、肺结核等妊娠合并症,除外其他急慢性器质性病变。过期产组严格核对月经周期、胎动时间及孕早期B超检查以确认妊娠真正过期。
2.方法
（1）标本采集：两组孕妇均在胎盘娩出5 min内，于胎盘母面中央垂直至胎儿面贯穿取材，约2 cm×2 cm×2 cm 大小，立即用福尔马林固定，24 h后石蜡包埋固定，5 μm连续切片2张，60℃烤箱过夜烤干后置37℃温箱保存备用，免疫组织化学法（S-P法）染色测Survivin蛋白表达，剩下一张备用。
（2）实验方法:免疫组织化学方法-链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化酶法检测胎盘滋养细胞层Survivin表达。Survivin鼠抗人多克隆抗体为Maixin公司产品, 试剂购自福州迈新
生物技术开发有限公司，并设置相应的阳性和阴性对照。细胞内出现棕黄色颗粒为阳性信号，Survivin为胞浆染色，在400倍镜视野下每张免疫组化片随机测试10个视场,每个视场随机取绒毛滋养层和绒毛间质各10个部位。研究采用暨南大学医学院妇产科教研室的Leica Q550IW图像分析系统,应用申洪等［1，2］提出的阳性单位(positive unit,PU)概念定量表达免疫组化阳性反应度。PU=［(Gα-Gβ)/Gmax］×100，Gα、Gβ分别为待测结构和背景的平均灰度，Gmax等于256，为检测仪的最大灰度。
3.统计学方法 采用t检验进行统计学处理，以P＜0.05为显著性标准。
结果
两组胎盘滋养细胞层Survivin蛋白表达情况见表1。胎盘滋养细胞层Survivin蛋白表达足月产组高于过期产组(P＜0.01)。两组Survivin蛋白在绒毛滋养细胞及绒毛间质细胞的表达见图1、图2。
讨论
细胞凋亡在多细胞动物的生长发育及维持机体平衡等方面起非常重要的作用，细胞凋亡的紊乱与许多疾病相关。人们对正常妊娠的胎盘凋亡情况进行了大量的研究，发现随着妊娠的进展，胎盘的凋亡发生率逐渐升高，表明凋亡是胎盘发育成熟过程中的一个生理现象［3］。许多学者认为，妊娠的病理因素与细胞凋亡的调节紊乱有关，例如宫内胎儿生长迟缓(IUGR)患者胎盘组织中凋亡的发生率明显增加［4］，可能过度的凋亡影响了胎盘的功能，进而影响妊娠的结局。
本研究结果显示，足月妊娠的胎盘与过期妊娠的胎盘相比，两者滋养细胞层中Survivin的表达，前者的表达高于后者，差别有统计学意义。随着妊娠的进展，胎盘组织的成分和功能均发生相应的变化，以适应孕期胎儿的生长发育。细胞凋亡是细胞生长代谢的形式，随着孕周的变化也发生相应改变［5］。Stephen 等［6］采用光镜下观察计数的方法研究了23例正常足月妊娠和14例过期妊娠的胎盘中细胞凋亡的情况，发现过期妊娠的胎盘细胞凋亡发生率明显增加。在本研究中，过期妊娠胎盘中凋亡抑制蛋白Survivin的表达明显降低,这与Stephen的研究中胎盘凋亡发生率增加是相一致的，体现了基因蛋白调节与形态学变化的一致性。
Survivin 基因是一种凋亡抑制基因，其表达产物具有独特结构,能够保护特定细胞抵抗的一系列刺激原诱导，抑制细胞凋亡。Shiozaki等［7］将Survivin定位在细胞滋养细胞及绒毛外滋养细胞。且从早孕期开始一直持续至足月和过期妊娠。Survivin表达的减少，抑凋亡调节降低，导致胎盘滋养层凋亡增加，当凋亡细胞的比例增加到影响胎盘功能的时候，便进入病理状态，最终导致发生胎盘功能不全，临床表现为胎儿窘迫、胎死宫内、死产、新生儿窒息和新生儿死亡的发生率增加。笔者认为在正常孕妇胎盘组织中发生细胞凋亡是一种生理现象，而在过期妊娠患者胎盘组织中发生的细胞凋亡则是病理性的。随着细胞凋亡的基础性研究的进展和突破，将会对过期妊娠的预防和治疗提供新的契机。
参考文献
［1］申 洪，陆药丹.免疫组织化学染色的定量方法研究［J］.生物医学工程学杂志，1993，10（3）：281-285.
［2］申 洪.免疫组织化学染色的定量方法研究［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，1995，4（1）：89-92.
［3］Baker PN，Smith SC，Symonds EM，et al.Placental apoptosis in normal human preganacy［J］.Am J Obstet Gynecol，1997，177(1):57-65.
［4］Levy R，Smith SD，Yusuf K，et al.Trophoblast apoptosis from pregnancies complicated by fetal growth restriction is associated with enhanced p53 expression［J］.Am J Obstet Gynecol,2002,186(5):1056-1061.
［5］De Falco M,De luca L,Acanfora F,et al.Alteration of the Bcl-2:Bax ratio in the placeta as pregnancy proceeds［J］.Histochem J,2001,33(7):421-425.
［6］Smith SC,Baker PN.Placetal apoptosis is increased in postterm pregnan-cies［J］.British J Obstetrics Gynaecology,1999,106:861-862.
［7］Shiozaki AKataoka K，Fujimura M，Yuki H，et al.Survivin inhibits apoptosis in cytotrophoblasts［J］.Placenta，2003，24(1):65-76.
(收稿日期：2008-03-16 修回日期：2008-06-11)
(编辑：潘明志 英文审校：钟京梓)
【关键词】 胎盘；过期妊娠；滋养细胞；凋亡；Survivin蛋白
文章编号：1003-1383(2008)02-0255-02中图分类号：R 714.21 文献标识码：A
Study on Expression of Survivin Protein in Trophoblast Cells of Placenta of Postdate LaborCHEN Cairong1，WANG Zineng2，GUO xiaoyan1，HU Qinglan1，LIU kunping3
（1.Department of Obestetrics and Gynecology of the Fifth Affiliated Hospital of Jinan
University，Guangdong Qingyuan 511500；2.Department of Obestetrics and Gynecology of the First Affiliated Hospital of
Jinan University,Guangdong Guangzhou 510630；3.Department of pathobiology of
the FifthAffiliated Hospital of Jinan University,Guangdong Qingyuan 511500）
【Abstract】 Objective To study the relationship between postdatelabor and the trophoblast apoptosis by observing the expression of Survivin protein in the trophoblasts of placenta.
Methods Immunnohistochemistry was used to detect the expression of Survivin protein in the trophoblasts of placenta which were taken from 10 samples of postdate labor and 10 samples of full-term labor.Results The expressionin of Survivin protein in the trophoblasts of postdate labor was (PU:6.67±0.45) and in full-term labor group was (PU:8.83±0.67).The expression of Survivin protein in the trophoblasts of full-term labor was remarkably higher than that in the placenta of postdate labor. There was significant difference between them.Con
clusion Survivin may be inhibited by trophoblast apoptosis .it might be correlated with the postdate labor.
【Key words】 placenta；postdate labor；trophoblasts；apoptosis；Survivin
近年来，随着细胞凋亡现象的提出，细胞凋亡分子调节机制的逐渐阐明，妊娠与凋亡相关性的研究也逐渐受到重视。细胞凋亡是在基因调控下有新蛋白合成的主动发生的现象。许多资料表明细胞凋亡的异常可能影响妊娠的正常进展，影响胎盘功能，进而导致妊娠疾病的发生。过期妊娠患者胎盘病理改变可引起胎盘氧储备能力下降，并与胎儿缺氧有关，但引起胎盘病理改变的原因尚不清楚。明确胎盘功能降低的原因是解决不良妊娠结局的关键。本研究选取Survivin蛋白在过期妊娠胎盘滋养细胞层表达的情况，探讨胎盘细胞凋亡在过期妊娠胎盘中的作用，旨在为揭示过期妊娠的病理机制提供实验依据，更好地改善围产结局。
对象和方法
1.对象 选择于2002年12月至2003年5月在暨南大学医学院附属第五医院妇产科住院分娩的正常足月妊娠产妇10例，过期妊娠产妇10例。其中足月产组产妇年龄24～32岁，平均(27.6±3.3)岁；过期产组产妇年龄23～31岁，平均(26.8±3.1)岁。两组年龄差别无统计学意义(t=0.792，P＞0.05)。两组均除外妊娠高血压综合征(妊高征)、前置胎盘、胎盘早剥、羊水过多、胎儿宫内发育迟缓等病理妊娠,除外糖尿病、肝炎、甲亢、心脏病、肺结核等妊娠合并症,除外其他急慢性器质性病变。过期产组严格核对月经周期、胎动时间及孕早期B超检查以确认妊娠真正过期。
2.方法
（1）标本采集：两组孕妇均在胎盘娩出5 min内，于胎盘母面中央垂直至胎儿面贯穿取材，约2 cm×2 cm×2 cm 大小，立即用福尔马林固定，24 h后石蜡包埋固定，5 μm连续切片2张，60℃烤箱过夜烤干后置37℃温箱保存备用，免疫组织化学法（S-P法）染色测Survivin蛋白表达，剩下一张备用。
（2）实验方法:免疫组织化学方法-链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化酶法检测胎盘滋养细胞层Survivin表达。Survivin鼠抗人多克隆抗体为Maixin公司产品, 试剂购自福州迈新
生物技术开发有限公司，并设置相应的阳性和阴性对照。细胞内出现棕黄色颗粒为阳性信号，Survivin为胞浆染色，在400倍镜视野下每张免疫组化片随机测试10个视场,每个视场随机取绒毛滋养层和绒毛间质各10个部位。研究采用暨南大学医学院妇产科教研室的Leica Q550IW图像分析系统,应用申洪等［1，2］提出的阳性单位(positive unit,PU)概念定量表达免疫组化阳性反应度。PU=［(Gα-Gβ)/Gmax］×100，Gα、Gβ分别为待测结构和背景的平均灰度，Gmax等于256，为检测仪的最大灰度。
3.统计学方法 采用t检验进行统计学处理，以P＜0.05为显著性标准。
结果
两组胎盘滋养细胞层Survivin蛋白表达情况见表1。胎盘滋养细胞层Survivin蛋白表达足月产组高于过期产组(P＜0.01)。两组Survivin蛋白在绒毛滋养细胞及绒毛间质细胞的表达见图1、图2。
讨论
细胞凋亡在多细胞动物的生长发育及维持机体平衡等方面起非常重要的作用，细胞凋亡的紊乱与许多疾病相关。人们对正常妊娠的胎盘凋亡情况进行了大量的研究，发现随着妊娠的进展，胎盘的凋亡发生率逐渐升高，表明凋亡是胎盘发育成熟过程中的一个生理现象［3］。许多学者认为，妊娠的病理因素与细胞凋亡的调节紊乱有关，例如宫内胎儿生长迟缓(IUGR)患者胎盘组织中凋亡的发生率明显增加［4］，可能过度的凋亡影响了胎盘的功能，进而影响妊娠的结局。
本研究结果显示，足月妊娠的胎盘与过期妊娠的胎盘相比，两者滋养细胞层中Survivin的表达，前者的表达高于后者，差别有统计学意义。随着妊娠的进展，胎盘组织的成分和功能均发生相应的变化，以适应孕期胎儿的生长发育。细胞凋亡是细胞生长代谢的形式，随着孕周的变化也发生相应改变［5］。Stephen 等［6］采用光镜下观察计数的方法研究了23例正常足月妊娠和14例过期妊娠的胎盘中细胞凋亡的情况，发现过期妊娠的胎盘细胞凋亡发生率明显增加。在本研究中，过期妊娠胎盘中凋亡抑制蛋白Survivin的表达明显降低,这与Stephen的研究中胎盘凋亡发生率增加是相一致的，体现了基因蛋白调节与形态学变化的一致性。
Survivin 基因是一种凋亡抑制基因，其表达产物具有独特结构,能够保护特定细胞抵抗的一系列刺激原诱导，抑制细胞凋亡。Shiozaki等［7］将Survivin定位在细胞滋养细胞及绒毛外滋养细胞。且从早孕期开始一直持续至足月和过期妊娠。Survivin表达的减少，抑凋亡调节降低，导致胎盘滋养层凋亡增加，当凋亡细胞的比例增加到影响胎盘功能的时候，便进入病理状态，最终导致发生胎盘功能不全，临床表现为胎儿窘迫、胎死宫内、死产、新生儿窒息和新生儿死亡的发生率增加。笔者认为在正常孕妇胎盘组织中发生细胞凋亡是一种生理现象，而在过期妊娠患者胎盘组织中发生的细胞凋亡则是病理性的。随着细胞凋亡的基础性研究的进展和突破，将会对过期妊娠的预防和治疗提供新的契机。
参考文献
［1］申 洪，陆药丹.免疫组织化学染色的定量方法研究［J］.生物医学工程学杂志，1993，10（3）：281-285.
［2］申 洪.免疫组织化学染色的定量方法研究［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，1995，4（1）：89-92.
［3］Baker PN，Smith SC，Symonds EM，et al.Placental apoptosis in normal human preganacy［J］.Am J Obstet Gynecol，1997，177(1):57-65.
［4］Levy R，Smith SD，Yusuf K，et al.Trophoblast apoptosis from pregnancies complicated by fetal growth restriction is associated with enhanced p53 expression［J］.Am J Obstet Gynecol,2002,186(5):1056-1061.
［5］De Falco M,De luca L,Acanfora F,et al.Alteration of the Bcl-2:Bax ratio in the placeta as pregnancy proceeds［J］.Histochem J,2001,33(7):421-425.
［6］Smith SC,Baker PN.Placetal apoptosis is increased in postterm pregnan-cies［J］.British J Obstetrics Gynaecology,1999,106:861-862.
［7］Shiozaki AKataoka K，Fujimura M，Yuki H，et al.Survivin inhibits apoptosis in cytotrophoblasts［J］.Placenta，2003，24(1):65-76.
(收稿日期：2008-03-16 修回日期：2008-06-11)
(编辑：潘明志 英文审校：钟京梓)