耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌噬菌体vBKpnP1的分离鉴定和生物学特性研究

来源 :陆军军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lzj509649444
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目的 分离出1株裂解碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)的噬菌体,研究其生物学特性和全基因组信息。方法 采用双层琼脂平板法从西部战区总医院污水中分离纯化噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体的形态,测定噬菌体的生物学特性和体外抑菌活性,进行全基因组测序并分析其结构特征,系统发育进化树和比较基因组分析其进化关系。结果 分离出1株烈性噬菌体,命名为vB_KpnP1,形成的噬菌斑为2~3 mm透明的圆形,周围有明显的晕环;电镜下发现该噬菌体的头部大小约68.2 nm×64.3 nm,尾部长约11 nm,其头部为正二十面体,有1条不可收缩的短尾,属于有尾噬菌体目,自复制短尾噬菌体科;其最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)为0.000 1,潜伏期为10 min,裂解期为30 min,爆发量为26 PFU/cell; 10 min吸附率约为80%;该噬菌体对氯仿不敏感,在温度为10~50℃、pH值为4~12条件下较稳定;其对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌裂解率为54.55%(12/22);体外抑菌实验表明其可抑制宿主菌的生长。噬菌体vB_KpnP1为双链DNA(dsDNA),基因组全长为40 352 bp, GC含量为53.09%,含有50个编码序列(coding sequence, CDS)。结论 成功分离出1株具有治疗碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌感染潜力的毒性噬菌体vB_KpnP1。
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