【摘 要】
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目的:研究重组人组织型纤溶酶原激剂突变体(reteplase,r-PA)基因的克隆和表达,并对表达产物进行活性鉴定.方法:通过PCR的方法从t-PA基因上扩增得到r-PA基因的编码序列,并克隆
【机 构】
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北京江中泽生科技有限责任公司,北京,100050北京理工大学新医药开发研究中心,北京,100081;
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目的:研究重组人组织型纤溶酶原激剂突变体(reteplase,r-PA)基因的克隆和表达,并对表达产物进行活性鉴定.方法:通过PCR的方法从t-PA基因上扩增得到r-PA基因的编码序列,并克隆到pUC19载体中,经DNA测序正确后,将该基因克隆到含有T7启动子的高效表达质粒pJZ-100中,转化E.coli BL21(DE3),得到含有r-PA基因的工程菌.工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况.提取包涵体,经过体外稀释法复性,亲和色谱层析纯化,测定产物的活性.结果:表达的重组蛋白约占可溶性总蛋白的20%,复性并纯化后测定活性为58000IU/mg.结论:成功构建了重组r-PA的表达质粒,表达产物具有良好的生物活性.
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