论文部分内容阅读
目的 对弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY-39新基因亚型AmpC β-内酰胺酶进行酶特性研究.方法 pET-32a(+)/CMY-39表达质粒在BL21 (DE3)中诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定酶蛋白的表达；原菌株和重组表达菌株进行药敏试验,并提取重组表达菌株的CMY-39酶蛋白进行AmpC酶三维试验和酶动力学检测.结果 pET-32a(+)/CMY-39在大肠埃希菌中大量表达,蛋白相对分子质量约为60 000,用特异抗体经Western检测该条带为阳性；AmpC酶三维试验为阳性；CMY型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢西丁具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致.结论 证实重组菌株pET-32a(+)/CMY-39能高效表达CMY-39酶蛋白,表达CMY型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性有所增加,亲和力下降.