反义PCDNA3.1(+)/TIMP-1真核表达载体的构建与鉴定

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目的:构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒。方法:用Trizol Reagent抽提肝组织中总RNA.采用两对套式引物,以逆转录巢式PCR方法扩增TIMP-1目的片段,双酶切纯化PCR产物及PCDNA3.1(+)真核细胞表达质粒。再将TIMP-1反向插入PCDNA3.1(+)线性质粒,即构建成反义TIMP-1/PCDNA3.1(+)真核细胞表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定。结果:DNA测序结果与预期目的片段序列一致。结论:反义TIMP-1/PCDNA3.1(+)真核细胞表达质粒构建成功。
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