鸭DCN基因编码区扩增、序列分析及其在大肠杆菌中的表达、蛋白纯化

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采用RT-PCR方法从鸭腿肌总RNA中扩增了鸭核心蛋白聚糖基因编码区序列,进行序列分析,并将编码鸭核心蛋白聚糖成熟蛋白的核酸片段连入原核表达载体pET-32a(+)中,加入IPTG诱导其表达后,亲和层析纯化表达的蛋白.采用SDS-PAGE检测,用质谱方法对表达的蛋白进行鉴定.研究成功克隆出鸭核心蛋白聚糖基因编码区序列,序列分析表明,鸭DCN编码区序列由1 074个碱基组成,编码357个氨基酸,其中信号肽有16个氨基酸.将鸭DCN蛋白划分为9个结构域(LRR1-9),结合人DCN序列进行序列分析推测结构域中LRR4、5与TGF-β可能存在一定关系.SDS-PAGE检测和质谱鉴定结果表明获得了分子量为54.7 ku的鸭DCN融合蛋白.
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