论文部分内容阅读
目的 观察角化细胞生长因子(KGF)在人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向汗腺样细胞(SGCs)分化过程中的表达活性及其促分化的效应.方法 利用流式细胞术检测MSCs的标志物抗原CD29、CD90、CD45;成骨及成脂分化诱导培养基培养21 d,检测其成骨、成脂分化潜能.免疫细胞化学法检测hUC-MSC、SGCs的汗腺标志物癌胚抗原(CEA)、角蛋白(CK) 14、CK19水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)、Western blot法检测分化期间7、14、21 d的上清液和细胞中的汗腺发育基因KGF及其受体成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)的表达特性.实验分组:以普通汗腺培养基、干细胞培养基以及热休克汗腺上清液+普通汗腺培养基构成的分化诱导培养基(MIX)为对照组,重组人角化细胞生长因子(rhKGF)+普通汗腺培养基构成分化诱导培养基(KGF)为实验组;对不同分组中hUC-MSCs分化为SGCs的效能进行评价.结果 hUC-MSCs表达CD29、CD90的阳性率分别为92.1%、98.1%;阴性表达CD45为0.2%;可分化为ALP染色阳性的成骨细胞和油红-O染色阳性的成脂细胞.经过分化的SGCs(SGCs-MIX、SGCs-KGF)均具有类似正常汗腺(SGs)形态;免疫细胞化学检测结果显示,SGCs-MIX、SGCs-KGF可以阳性表达CEA、CK14、CK19,而未分化的hUC-MSCs则未表达.PCR及Western blot检测结果显示,不同分组中的SGCs均可表达KGF及受体FGFR2,活性明显高于hUC-MSCs组(P<0.05).ELISA检测结果显示,rhKGF在SGCs分化过程中7、14、21d的表达量分别为63.1、74.6、84.2 ng/L,明显高于hUC-MSCs对照组中的2.3、4.1、7.3 ng/L(P <0.05).结论 在hUC-MSCs分化为SGCs过程中具有分泌KGF的活性,KGF具有促进hUC-MSCs向分化为SGCs的潜能.