【摘 要】
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以新型鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)ORF2基因为序列设计1对特异性引物,利用PCR方法进行扩增,将其克隆到原核表达载体pET-30a中,转化DH5α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后,获得重组质粒pET30a-ORF2.随后转化BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白.将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗鹅星状病毒衣壳蛋白的多克隆抗体.结果:成功获得ORF2基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,
【机 构】
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江苏海洋大学食品科学与工程学院,江苏连云港222005;江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室,江苏连云港222005;江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州22
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以新型鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)ORF2基因为序列设计1对特异性引物,利用PCR方法进行扩增,将其克隆到原核表达载体pET-30a中,转化DH5α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后,获得重组质粒pET30a-ORF2.随后转化BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白.将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗鹅星状病毒衣壳蛋白的多克隆抗体.结果:成功获得ORF2基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,大小约84 kDa,且均能与His单抗和鹅阳性血清特异反应.制备的多克隆抗体,Western blot检测能与重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验(IFA)检测也能与新型鹅星状病毒发生特异性反应.本试验结果表明,原核表达的新型鹅星状病毒结构蛋白ORF2及制备的多抗均具有良好的免疫原性和反应原性,为新型鹅星状病毒检测方法的建立及ORF2基因功能研究奠定了基础.
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通过分析不同海拔环境下饲养的湖羊小肠组织学结构的异同,探讨湖羊在高原集约化养殖的可行性.试验在同源同胎次异地繁育饲养的湖羊群中,各挑选40只体重相近的90日龄健康湖羊,分为低海拔组(山东)和高海拔组(青海),常规饲养,试验期150 d结束后每组随机选取6只公羊剖杀采集小肠,采用组织学及图像分析法,对肠绒毛高度、黏膜层厚度、杯状细胞数量、隐窝深度进行观测.结果 显示:低海拔组平均日增重显著高于高海拔组(P＜0.05),料重比则显著低于高海拔组(P＜0.05);低海拔组小肠各段绒毛高度、隐窝深度、黏膜层厚度均
为快速检测食源性动物中沙拉沙星及二氟沙星的药物残留,将沙拉沙星单克隆抗体(SAR-Ab)与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得到酶标抗体(McAb-HRP),从而建立直接竞争化学发光酶联免疫(dc-CLEIA)检测方法.结果 显示:经紫外扫描鉴定,McAb-HRP偶联成功;以包被抗原(SAR-1-OVA)浓度1.25 μg/mL,McAb-HRP稀释比1∶8000作为最佳工作条件,从而建立了dc-CLEIA分析法;精密度的平均批内批间变异系数均低于7％;建立的标准曲线呈线性关系,线性范围为0.312～20 ng
为确诊广东省江门市某规模化猪场保育仔猪发生脑膜炎死亡的病因,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、溶血性观察、生化鉴定、小鼠毒力试验和药敏试验、16S rRNA及M蛋白(SzP)基因序列分析进行鉴定.结果:从发病猪脑顶叶分离到1株致病菌,命名为SEZ20180618,分离菌在鲜血平板上生长出微隆起、圆滑湿润的小菌落,呈β溶血,革兰染色阳性、呈链状排列的球菌;16S rRNA基因序列分析显示,分离菌与马链球菌兽疫亚种处于同一分支,同源性在97％以上;SzP氨基酸序列与马链球菌兽疫亚种CT株、C
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