【摘 要】
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目的:从PERK-elF2α-CHOP信号通路角度观察甘草泻心汤(GXD)对溃疡性结肠炎(UC)肠黏膜屏障的保护作用.方法:①Caco-2细胞分为Normal组,Model组,GXD低、中和高剂量组,Tm诱导法建立内质网应激(ERS)模型,GXD各组在造模同时以中药含药血清干预.采用CCK8法检测细胞存活率,FCM检测细胞凋亡率和周期分布,TEER联合FITC-dextran示踪法共同反映细胞通透性,Western blot法检测PERK-elF2 α-CHOP通路核心蛋白的表达.②60只BALB/c小鼠
【机 构】
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浙江中医药大学附属第二医院消化内科,杭州310005;浙江中医药大学第一临床医学院,杭州310053;浙江中医药大学附属第二医院消化内科,杭州310005;浙江省立同德医院儿科,杭州310012;浙江
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目的:从PERK-elF2α-CHOP信号通路角度观察甘草泻心汤(GXD)对溃疡性结肠炎(UC)肠黏膜屏障的保护作用.方法:①Caco-2细胞分为Normal组,Model组,GXD低、中和高剂量组,Tm诱导法建立内质网应激(ERS)模型,GXD各组在造模同时以中药含药血清干预.采用CCK8法检测细胞存活率,FCM检测细胞凋亡率和周期分布,TEER联合FITC-dextran示踪法共同反映细胞通透性,Western blot法检测PERK-elF2 α-CHOP通路核心蛋白的表达.②60只BALB/c小鼠随机分为Normal组,Model组,GXD低、高剂量组和阳性对照组,DSS诱导法建立UC模型,GXD各组在造模同时以中药灌胃;观察小鼠的一般情况并计算DAI,结肠组织HE染色观察病理变化并计算TDI,TUNEL法检测肠上皮细胞(IECs)凋亡,ELISA法检测血清D-LAC、DAO的含量,Western blot法检测结肠组织通路核心蛋白的表达.结果:①细胞实验:与Model组比较,GXD中、高剂量组存活率均显著上升(P＜0.01),凋亡率均显著下降(P＜0.01),G2期比例均显著增加(P＜0.01),单层细胞的TEER值均显著升高(P＜0.01),FITC-dextran浓度均显著下降(P＜0.01),p-PERK、p-elF2α、ATF4和CHOP蛋白水平均显著降低(P＜0.01).②动物实验:与Model组比较,GXD各组的结肠炎症状和组织病理损伤均有不同程度的减轻,其DAI和TDI均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),结肠凋亡细胞数均显著减少(P＜0.05,P＜0.01),血清D-LAC、DAO的含量均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),组织中p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP和Bax的水平均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2的水平均显著升高(P＜0.01).结论:GXD通过抑制PERK-eIF2α-CHOP凋亡信号通路的激活,减少IECs凋亡、降低肠上皮通透性,从而保护肠黏膜屏障稳态,这可能是GXD治疗UC的部分机制.
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