【摘 要】
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用限制酶将pSK-TTR质粒上TTR基因切下,分别插入分泌型载体pPIC9和pPIC9K. 将重组的pPIC9K-TTR用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115 菌株,筛选获得G418高抗性转化子. 转
【机 构】
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复旦大学,生命科学学院,上海,200433
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用限制酶将pSK-TTR质粒上TTR基因切下,分别插入分泌型载体pPIC9和pPIC9K. 将重组的pPIC9K-TTR用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115 菌株,筛选获得G418高抗性转化子. 转化子经摇瓶发酵,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的rTTR表达. 经DEAE-sepharose F. F. 离子交换柱和Superdex75分子筛层析,得到蛋白纯度大于95%的rTTR. 经Western blotting,分子质量和等电点测定等证明,毕赤氏酵母表达的rTTR与人血浆提取的TTR极为相似.
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