【摘 要】
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橡胶树炭疽病主要由胶孢炭疽菌(Colletotric hum gloeosporioides)引起,是影响橡胶产量的重要病害之一.病原菌功能缺失突变体的构建是研究病菌致病分子机理的有效手段.为了获
【机 构】
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海南大学,海南省热带生物资源可持续利用重点实验室,海口,570228
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橡胶树炭疽病主要由胶孢炭疽菌(Colletotric hum gloeosporioides)引起,是影响橡胶产量的重要病害之一.病原菌功能缺失突变体的构建是研究病菌致病分子机理的有效手段.为了获得充足的胶孢炭疽菌突变体用于解析其致病机理,本研究对根癌农杆菌介导的胶孢炭疽菌遗传转化体系进行优化.结果表明,当AGL-1农杆菌OD60=0.8、胶孢炭疽菌孢子浓度为106个/mL、乙酰丁香酮(AS)浓度为100μmol/L时,共转化48 h,可使转化效率达到480个转化子/106个孢子.基于这个体系,构建了一个库容量为861的T-DNA突变体库.随机挑选8个转化子进行PCR验证,结果均为阳性.从突变体库中筛选出1株致病力下降的突变体,对其进行TAIL-PCR扩增插入位点侧翼序列,得到一个750 bp序列进行序列测定.通过与野生型菌株基因组进行序列比对,确定了T-DNA的插入位置.为进一步研究橡胶树胶孢炭疽菌致病分子机理提供理论参考.
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